Posaconazole

Posaconazole heeft een krachtige trypanocide activiteit. Amiodaron werkt synergetisch met deze verbinding. Het beïnvloedt en verstoort ook de Ca²⁺ homeostase in T. cruzi. Deze chemische stof blokkeert de biosynthese van ergosterol, wat essentieel is voor het overleven van de parasiet. Het heeft een duidelijk, dosisafhankelijk effect op de proliferatie van de epimastigote (extracellulaire) stadia, met een minimale remmende concentratie van 20 nM en een IC50 van 14 nM. Tegen de klinisch relevante intracellulaire amastigote vorm van de parasiet is deze verbinding zelfs krachtiger. Het heeft minimale remmende concentratie- en IC50-waarden van 3 nM en 0,25 nM. [1] Het is actief tegen isolaten van Candida en Aspergillus spp. die resistentie vertonen tegen Fluconazole, Voriconazole en Amphotericin B en is veel actiever dan de andere triazolen tegen zygomyceten. [2]

Behandeling van geïnfecteerde dieren met amiodaron alleen vermindert parasitemie, verhoogt de overleving 60 dagen na infectie (0% voor onbehandelde controles versus 40% voor met amiodaron behandelde dieren) en vertraagt, wanneer toegediend in combinatie met Posaconazole, de ontwikkeling van parasitemie. [1] Gelijktijdige toediening van deze verbinding en Boost Plus verhoogt de blootstelling aan het geneesmiddel in vergelijking met de toediening van deze verbinding alleen in nuchtere toestand. Voedsel, met name maaltijden met een hoog vetgehalte, verhoogt de biologische beschikbaarheid van deze verbinding aanzienlijk. De systemische blootstelling aan deze verbinding neemt 4- en 2,6-voudig toe wanneer het respectievelijk wordt geconsumeerd met een vetrijke en een vetvrije maaltijd. [3] Deze verbinding en Amiodaron kunnen een effectieve anti-T. cruzi-therapie vormen met weinig bijwerkingen. [4] Bij tweemaal daagse doses van ≥15 mg/kg lichaamsgewicht verlengt deze verbinding de overleving van de muizen en vermindert de weefselbelasting. [5]

• Cellijnen

  Epimastigote form of T. cruzi amastigotes

• Concentraties

  0 nM -4 nM

• Incubatietijd

  96 hours

• Methode

  The epimastigote form of the parasite is cultivated in liver infusion tryptose medium, supplemented with 10% new born calf serum at 28 °C with strong (120 rpm) agitation. Cultures are initiated at a cell density of 2 × 10⁶ epimastigotes/mL, and Posaconazole is added at a cell density of 0.5−1.0 × 10⁷ epimastigotes/mL. Cell densities are measured by using an electronic particle counter as well as by direct counting with a hemocytometer. Cell viability is followed by Trypan blue exclusion, using light microscopy. Amastigotes are cultured in Vero cells maintained in minimal essential medium supplemented with 1% fetal calf serum in a humidified atmosphere (95% air−5% CO₂) at 37 °C. Cells are infected with 10 tissue culture-derived trypomastigotes per cell for 2 hours and then washed three times with phosphate-buffered saline (PBS) to remove nonadherent parasites. Fresh medium with and without this compound is added, and the cells are incubated for 96 hours with a medium change at 48 hours. The percent of infected cells and the numbers of parasites per cell are determined directly using light microscopy, and a statistical analysis of the results is carried out. IC50 values are calculated by nonlinear regression, using the program GraFit. Fractional inhibitory concentrations (FIC) are calculated. Cytoplasmic free Ca²⁺ concentrations in control and drug-treated extracellular epimastigotes are determined by fluorimetric methods using Fura-2. Subcellular Ca²⁺ levels and mitochondrial membrane potentials are monitored on individual Vero cells infected with T. cruzi amastigotes by using time-scan confocal microscopy. Briefly, Vero cells heavily infected (72 hours) with T. cruzi amastigotes are plated onto 22 × 40 mm glass coverslips (0.15 mm thickness) and incubated simultaneously with 10 μM cell-permeant Rhod-2 and 10 μg/mL Rhodamine-123 for 50 minutes at 37 °C in culture medium and then washed and incubated with Ringer's solution, with or without amiodarone. Under the conditions used fluorescence of Rhod-2 comes mainly from intracellular Ca²⁺-rich compartments, like mitochondria, since its low affinity for Ca²⁺ limits its fluorescence in the Ca²⁺-poor cytoplasm of the Vero cells or amastigotes. Rhodamine-123 is a mitochondrion-specific cationic dye, which distributes across the inner mitochondrial membranes strictly according to their membrane potential.

• Dierlijke modellen

  Female NMRI−IVIC mice with acute Chagas

• Doseringen

  20 mg/kg/d

• Toediening

  Oral