Pelitinib (EKB-569)

CatalogusnummerS1392 Batch:S139203

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C24H23ClFN5O2
Moleculair gewicht 467.92 CAS-nr. 257933-82-7
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Pelitinib (EKB-569) is een potente irreversibele EGFR-remmer met een IC50 van 38,5 nM. Deze verbinding remt ook licht Src, MEK/ERK en ErbB2 met IC50s van respectievelijk 282 nM, 800 nM en 1255 nM. Fase 2.
Doelen
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
In vitro Pelitinib (EKB-569) vertoont een veel hogere remmende activiteit tegen EGFR, vergeleken met het nauw verwante c-erbB-2, evenals andere kinasen zoals Src, Cdk4, c-Met, Raf en MEK/ERK, met IC50 variërend van 282 nM voor Src tot >20 μM voor Cdk4. Consistent remt deze verbindingbehandeling significant de autofosforylering van EGFR maar niet van c-Met in A431-cellen. Het remt potent de proliferatie van normale menselijke keratinocyten (NHEK), evenals A431 en MDA-468 tumorcellen met IC50 van respectievelijk 61 nM, 125 nM en 260 nM, terwijl het weinig activiteit vertoont tegen MCF-7-cellen met IC50 van 3,6 μM. Deze chemische stof remt EGF-geïnduceerde fosforylering van EGFR in A431- en NHEK-cellen met IC50 van 20-80 nM, evenals de fosforylering van STAT3 met IC50 van 30-70 nM. Bij 75-500 nM remt het ook specifiek de activering van AKT en ERK1/2, zonder het NF-κB-pad te beïnvloeden. In NHEK-cellen remt deze verbinding ook potent TGF-α-gemedieerde EGFR-activering met IC50 van 56 nM, evenals activering van STAT3 en ERK1/2 met IC50 van respectievelijk 60 nM en 62 nM.
In vivo Een enkele orale dosis van 10 mg/kg Pelitinib (EKB-569) remt potent de EGFR-fosforylering in A431-xenografts met overexpressie van EGFR, met 90% binnen 1 uur en met >50% na 24 uur. Toediening van deze verbinding bij 20 mg/kg/dag remt tumorigenese bij APCMin/+-muizen met 87%, wat overeenkomt met het effect van 2 keer doses EKI-785 (40 mg/kg/dag), consistent met een grotere in vivo potentie. Deze chemische stof remt selectief EGFR-signalering in epitheelcellen van de luchtwegen in vivo. In het muismodel van remodellering van het luchtwegepitheel dat induceerbaar is door virale infectie en gekenmerkt wordt door een vertraagde maar permanente overgang naar slijmbekercelmetaplasie, corrigeert deze verbindingbehandeling bij 20 mg/kg/dag alle 3 aspecten van epitheliale remodellering, door de toename van trilhaarcellen en de afname van Clara-cellen volledig te blokkeren, en de metaplasie van slijmbekercellen significant te remmen.
Kenmerken Een verbeterde versie van EKI-785.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • Autofosforylering van EGFR in cellen

    Voor experimenten met cellen in kweek worden A431-cellen gedurende 2,75 uur behandeld met verschillende concentraties Pelitinib (EKB-569) voordat ze gedurende 0,25 uur samen met 100 ng/mL EGF worden geïncubeerd. Cellen worden tweemaal gewassen met koude fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) voordat ze worden toegevoegd aan lysisbuffer (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% natriumdeoxycholaat, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatine A, 10 mg/mL leupeptine, 20 KIU/mL aprotinine, 2 mM natriumorthovanadaat en 100 mM natriumfluoride) gedurende 20 minuten op ijs, vóór immunoprecipitatie en SDS-PAGE-immunoblotting. Voor immunoprecipitatie worden gekweekte cellen in koude lysisbuffer geplaatst en onmiddellijk op ijs gehomogeniseerd met een polytron met verschillende pulsen. Het homogenaat wordt eerst gecentrifugeerd bij 2500 rpm (20 minuten, 4 °C) en daarna opnieuw bij 14.000 rpm in een microcentrifuge (10 minuten, 4 °C). Supernatanten (1000 μg eiwit) worden gedurende 2 uur bij 4 °C geïncubeerd met 15 mL EGFR polyklonaal antilichaam. Na 2 uur wordt 50 μL proteïne G plus/proteïne A agarose kralen toegevoegd en gedurende 2 uur bij 4 °C geïncubeerd met constante rotatie. Na wassen met lysisbuffer worden de kralen gedurende 2 minuten gekookt in Laemmli-monsterbuffer. Eiwitten worden vervolgens gescheiden door SDS-PAGE, overgebracht op een immobilonmembraan en 's nachts geprobeerd met een anti-fosfotyrosine antilichaam geconjugeerd met mierikswortelperoxidase (HRP). Membranen worden ontwikkeld met behulp van het ECL-reagens. Totaal EGFR-eiwit wordt bepaald door membranen te strippen en opnieuw te proben met receptorgeoriënteerde antilichamen. Kwantificering van banden gebeurt door densitometrie, met behulp van ImageQuant-software met een Molecular Dynamics laser transmissie scanner.
Celassay:

[2]
  • Cellijnen

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • Concentraties

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Incubatietijd

    5 days

  • Methode

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
Dierstudie:

[1]
  • Dierlijke modellen

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • Doseringen

    10, or 20 mg/kg/day

  • Toediening

    Oral gavage

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Klantproductvalidatie

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

Gegevens van [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

Gegevens van [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

Gegevens van [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) Is geciteerd door 11 Publicaties

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.