PD 98059

PD98059 remt ofwel basale MEK1 of een gedeeltelijk geactiveerde MEK geproduceerd door mutatie van serine op residuen 218 en 222 naar glutamaat (MEK-2E) met een IC50 van 2 μM. Deze verbinding remt de MAPK-homologen JNK en P38 niet. Het is zeer selectief tegen MEK, aangezien het een aantal andere kinase-activiteiten niet remt, waaronder Raf-kinase, cAMP-afhankelijk kinase, proteïne kinase C, v-Src, epidermale groeifactor (EGF) receptorkinase, insulinereceptorkinase, PDGF-receptorkinase en fosfatidylinositol 3-kinase. Deze remmer remt PDGF-gestimuleerde activering van MAPK en thymidine-incorporatie in 3T3-cellen met een IC50 van respectievelijk ~10 μM en ~7 μM. [1] Het voorkomt krachtig de activering van MEK1 door Raf of MEK-kinase met een IC50 van 4 μM, en remt zwak de activering van MEK2 door Raf met een IC50 van 50 μM. Deze chemische stof remt de activering van MEK-homologen MKK4 en RK-kinase niet, die deelnemen aan stress- en interleukine-1-gestimuleerde kinasecascades in KB- en PC12-cellen, en de activering van p70 S6-kinase door insuline of epidermale groeifactor in Zwitserse 3T3-cellen. [2] Het blokkeert volledig de zenuwgroeifactor (NGF)-geïnduceerde differentiatie van PC12-cellen zonder de cellevensvatbaarheid te beïnvloeden. [3] Deze verbinding remt de proliferatie van RAW264.7-cellen in de kweek die RANKL bevat op een dosisafhankelijke manier, wat resulteert in een duidelijke afname van TRAP-positieve cellen. [4]

Behandeling van muizen 30 minuten voor focale cerebrale ischemie met PD98059 beschermt tegen schade, wat resulteert in een afname van het infarctvolume. [5] Voorbehandeling met deze verbinding 30 minuten van tevoren en vervolgens samen met uurlijkse ceruleïne-injecties gedurende 3 uur verbetert significant ceruleïne-geïnduceerde acute pancreatitis op basis van pancreas natgewicht en histologie. [6] Toediening van deze chemische stof (10 mg/kg) aan muizen 1 uur na carrageenan veroorzaakt een vermindering van alle gemeten ontstekingsparameters. [7]

• In vitro MEK-remmende activiteit

  De incorporatie van ³²P in myeline-basisch proteïne (MBP) wordt getest in aanwezigheid van glutathion S-transferase (GST) fusie-eiwitten die het 44-kDa MAPK (GST-MAPK) of het 45-kDa MEK (GST-MEK1) bevatten. Assays worden uitgevoerd in 50 μL van 50 mM Tris, pH 7.4/10 mM MgCl₂/2 mM EGTA/10 μM [γ-³²P]ATP met 10 μg GST-MEK1, 0.5 μg GST-MAPK en 40 μg MBP. Na incubatie bij 30°C gedurende 15 minuten worden de reacties gestopt door toevoeging van Laemmli SDS monsterbuffer. Gefosforyleerd MBP wordt gescheiden met SDS/10% PAGE.

• Cellijnen

  K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, and K562

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Incubatietijd

  3 dyas, or 7-10 days

• Methode

  For monolayer growth, cells are plated into multi-well plates at 10,000-20,000/mL. Forty-eight hours later, various concentrations of PD98059 are added to the cell growth medium and incubation is continued for an additional 3 days. Cells are then removed from the wells by incubation with trypsin and enumerated with a Coulter Counter. For growth in soft agar, cells are seeded into 35-mm dishes at 5,000-10,000 cells per dish with growth medium containing 0.3% agar and desired concentrations of this compound. After 7-10 days of growth, visible colonies are manually enumerated with the aid of a dissecting microscope.

• Dierlijke modellen

  Male Sprague–Dawley rats with acute pancreatitis

• Doseringen

  10 mg/kg

• Toediening

  Injection i.v.