Mycophenolate mofetil

Mycophenolate mofetil is een esterprodrug van het actieve immunosuppressivum mycofenolzuur (MPA). Dit laatste vertoont een niet-competitieve, selectieve en reversibele remmende activiteit tegen inosine monofosfaat dehydrogenase type I/II met een IC50 van respectievelijk 39 nM en 27 nM. Bovendien produceert MPA ook de concentratie-afhankelijke remming van de proliferatie van ConA-gestimuleerde T-cellen, LPS-gestimuleerde B-cellen en alloantigeen-specifieke T-cellen met een IC50 van respectievelijk 100 nM, 120 nM en 51 nM. [1] Deze verbinding met een hoge concentratie van 10 μg/mL induceert een sterke apoptosis in microgliale celculturen en verhoogt het aantal geactiveerde caspase-3 immunoreactieve apoptotische cellen. Bovendien remt het (1 μg/mL) de proliferatie van zowel microgliale cellen als astrocyten sterk. [2] Een recente studie toont aan dat deze chemische stof de omvang van neuronale celdood van organotypische hippocampale plakculturen na neuronale schade op een tijdsafhankelijke manier significant vermindert. [4]

In een heterotoop cardiaal transplantatiemodel van ACI-naar-Lewis ratten leidt behandeling met Mycophenolate mofetil in doses van 20 mg/kg en 40 mg/kg tot een verlenging van de overleving van het transplantaat, met een mediane overlevingstijd (MST) van respectievelijk 14,5 dagen en 18,5 dagen. [1] In het door bleomycine (BLM) geïnduceerde sclerodermie muismodel vermindert deze verbinding de infiltratie van ontstekingscellen, het hydroxyprolinegehalte van het weefsel en de huidverdikking. [3]

• IMP dehydrogenase Type I en II enzymatische activiteit

  IMP dehydrogenase Type I en II worden gezuiverd uit E. coli die menselijke enzymen tot expressie brengt. De test wordt uitgevoerd met behulp van een platte bodem, UV-transparante 96-wells plaat. Het uiteindelijke reactiemengsel van 200 μL bevatte 0,1 M Tris, 0,1 M KCl, 3 mM EDTA pH 8,0, 2 mM DTT, en 40 nM van IMP dehydrogenase Type I of Type II. De reactie wordt geïnitieerd door 400 μM NAD en 400 μM IMP toe te voegen, gevolgd door incubatie bij 37 °C gedurende 2,5 uur. De reactiesnelheid van de omzetting van NAD naar NADH wordt vervolgens gemeten op basis van de toename in absorptie bij 340 nm. De assays worden ook uitgevoerd in aanwezigheid van 50% menselijk serum om serum eiwitbinding door verschillende IMP dehydrogenase-remmers te schatten.

• Cellijnen

  ConA-stimulated T cells and LPS-stimulated B cells

• Concentraties

  0 to 10 μM

• Incubatietijd

  48 hours

• Methode

  The spleens of male Lewis rats aged 8 weeks are aseptically removed and teased into single-cell suspensions, and the resulting splenocytes are suspended in RPMI1640 medium containing 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin, and 100 μg/mL streptomycin. Assays are performed in flat-bottomed microtiter plates, with each well containing 150000 splenocytes in a total volume of 100 μL. Splenocytes are incubated in medium containing either 1 μg/mL Concanavalin A (ConA) or lipopolysaccharide (LPS) as T or B cell mitogen, respectively, along with various concentrations of this compound at 37 °C for 48 hours in a humidified atmosphere of 5% CO₂-95% air. During the final 6 hours of incubation, cells are pulsed with 1 μCi of ³H-thymidine/well, and harvested onto pressed fiberglass in a cell harvester. The uptake of ³H-thymidine by proliferating cells is measured using a liquid scintillation counter. The in vitro immune response of alloantigen-specific T cells is evaluated as a proliferation response using one-way mixed lymphocyte reaction assay. Mesenteric lymph nodes cells from male Lewis rats aged 8 weeks and splenocytes from male ACI rats aged 8 weeks are used as responder and stimulator cells, respectively. Single-cell suspensions are prepared, and the responder cells are cultured with irradiated (20 Gy) stimulator cells in RPMI1640 supplemented with 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin, in 96-well plates (U-bottom) and in the presence of various concentrations of this compound (total volume: 200 μL, 37 °C, 5% CO₂ humidified atmosphere, 72 hours). As a negative control, responder cells are cultured with irradiated splenocytes of Lewis rats. The cell proliferation is quantified by the uptake of ³H-thymidine.

• Dierlijke modellen

  Lewis rats with abdominal vascularized heterotopic cardiac transplantation.

• Doseringen

  ≤40 mg/kg

• Toediening

  oral administration