Motesanib Diphosphate (AMG-706)

Motesanib Diphosphate (AMG-706) heeft een brede activiteit tegen de menselijke VEGFR-familie en vertoont >1000 selectiviteit tegen EGFR, Src en p38 kinase. Het remt significant de VEGF-geïnduceerde cellulaire proliferatie van HUVEC's met een IC50 van 10 nM, terwijl het weinig effect heeft op bFGF-geïnduceerde proliferatie met een IC50 van >3.000 nM. Deze verbinding remt ook potent de PDGF-geïnduceerde proliferatie en SCF-geïnduceerde c-kit fosforylatie met een IC50 van respectievelijk 207 nM en 37 nM, maar is niet effectief tegen de EGF-geïnduceerde EGFR-fosforylatie en cellevensvatbaarheid van A431-cellen. [1] Hoewel het op zichzelf weinig antiproliferatieve activiteit vertoont op de celgroei van HUVEC's, sensibiliseert het de cellen significant voor gefractioneerde straling. [2]

Toediening van Motesanib Diphosphate (AMG-706) bij 100 mg/kg remt significant de VEGF-geïnduceerde vasculaire permeabiliteit op een tijdsafhankelijke manier. Orale toediening van deze verbinding tweemaal daags of eenmaal daags remt krachtig, op een dosisafhankelijke manier, de VEGF-geïnduceerde angiogenese met behulp van het rattenhoornvliesmodel met een ED50 van respectievelijk 2,1 mg/kg en 4,9 mg/kg. Het induceert een dosisafhankelijke tumorregressie van gevestigde A431-xenografts door selectief neovascularisatie in tumorcellen te richten. [1] Wanneer het in combinatie met straling wordt toegediend, vertoont het significante antitumoractiviteit in xenograftmodellen van plaveiselcelcarcinoom van het hoofd-halsgebied (HNSCC). [2] Behandeling met deze verbinding induceert ook significante dosisafhankelijke verminderingen in tumorgroei en bloedvatdichtheid van MCF-7, MDA-MB-231 of Cal-51 xenografts. [3]

• In vitro kinase assays

  Optimale enzym-, ATP- en substraatconcentraties (gastrinepeptide) worden voor elk enzym vastgesteld met behulp van homogene tijd-opgeloste fluorescentie (HTRF)-assays. Voor Motesanib Diphosphate (AMG-706) wordt een 10-punts dosis-respons curve getest voor elk enzym met een ATP-concentratie van tweederde K_m voor elk. De meeste assays bestaan uit enzym gemengd met kinase reactiebuffer [20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 100 mM NaCl, 1,5 mM EGTA]. Een eindconcentratie van 1 mM DTT, 0,2 mM NaVO₄ en 20 μg/mL BSA wordt vóór elke assay toegevoegd. Voor alle assays worden 5,75 mg/mL streptavidine-allofycocyanine en 0,1125 nM Eu-PT66 onmiddellijk vóór de HTRF-reactie toegevoegd. Platen worden 30 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd en afgelezen op een Discovery-instrument. IC50-waarden worden berekend met behulp van het Levenberg-Marquardt-algoritme in een vier-parameter logistische vergelijking.

• Cellijnen

  A431, MO7e, HUVEC and NHDF cells

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Incubatietijd

  2 hours

• Methode

  Cells are preincubated for 2 hours with different concentrations of Motesanib Diphosphate (AMG-706), and exposed with 50 ng/mL VEGF or 20 ng/mL bFGF for an additional 72 hours. After washing twice with DPBS, plates are frozen at -70 °C for 24 hours. Proliferation is assessed by the addition of CyQuant dye, and plates are read on a Victor 1420 workstation. IC50 data are calculated using the Levenberg-Marquardt algorithm into a four-parameter logistic equation.

• Dierlijke modellen

  Female Sprague-Dawley rats with induced corneal angiogenesis, and female CD-1 nu/nu mice injected s.c. with A431 cells

• Doseringen

  ~100 mg/kg

• Toediening

  Orally administered twice daily or once daily