Amuvatinib (MP-470)

Het hydrochloridezout van Amuvatinib (MP-470) remt verschillende mutanten van c-Kit, waaronder c-Kit^D816V, c-Kit^D816H, c-Kit^V560G en c-Kit^V654A, evenals een Flt3-mutant (Flt3^D835Y) en twee PDGFRα-mutanten (PDGFRα^V561D en PDGFRα^D842V), met IC50 van 10 nM tot 8,4 μM. Het bindt ook aan en remt verschillende c-Kit-mutanten, waaronder c-Kit^K642E, c-Kit^D816V en c-Kit^K642E/D816V. [2] Deze verbinding remt krachtig de proliferatie van OVCAR-3, A549, NCI-H647, DMS-153 en DMS-114 cellen, met IC50 van 0,9 μM–7,86 μM. [1] Het remt ook c-Kit en PDGFRα, met IC50-waarden van respectievelijk 31 μM en 27 μM. Het vertoont krachtige cytotoxiciteit tegen MiaPaCa-2, PANC-1 en GIST882 cellen, met IC50 van 1,6 μM tot 3,0 μM. [2] In MDA-MB-231 cellen remt het (1 μM) tyrosylfosforylering van AXL. [3] In LNCaP en PC-3, maar niet in DU145 cellen, vertoont het cytotoxiciteit met IC50 van respectievelijk 4 μM en 8 μM, en induceert het apoptose bij 10 μM. In LNCaP cellen (10 μM) veroorzaakt het G1-arrest en vermindert het de fosforylering van Akt en ERK1/2. [4] In SF767 cellen remt het (10 μM) c-Met-fosforylering en sensibiliseert het cellen voor straling. In combinatie met straling remt het (10 μM) glycogeen synthase kinase (GSK)3β activiteit, induceert het apoptose en verstoort het het herstel van dsDNA-breuken, waarschijnlijk door onderdrukking van Rad51. [5] [6]

In muis xenograftmodellen van HT-29-, A549- en SB-CL2-cellen remt Amuvatinib (MP-470) (10 mg/kg–75 mg/kg via i.p. of 50 mg/kg–200 mg/kg via p.o.) de tumorgroei. [1] Bij muizen met LNCaP-xenografts induceert deze verbinding (20 mg/kg) in combinatie met Erlotinib significant tumorremming (TGI). [4]

• Kinase-inhibitieassay van c-Kit en PDGFRα

  Voor het testen van de remmende activiteit tegen c-Kit en PDGFRα worden enzymen geïncubeerd met variërende concentraties Amuvatinib (MP-470) en radiogelabeld γ-³²P-ATP. Na 30 minuten worden de reactiemengsels geëlektroforeseerd op een acrylamidegel en wordt autofosforylering, gekwantificeerd door de hoeveelheid radioactiviteit die in het enzym is opgenomen, bepaald.

• Cellijnen

  MiaPaCa-2, PANC-1, and GIST882 cells

• Concentraties

  0–30 μM, dissolved in DMSO

• Incubatietijd

  96 hours

• Methode

  Cells are plated at a density of 2 × 10³ to 1 × 10⁴ cells per well in 100 μL medium on day 0 in 96-well Falcon microtitier plates. On day 1, ten μL of serial dilutions of Amuvatinib (MP-470) are added to the plates in quadruplicates. After incubation for 4 days, the cells are fixed with 10% Trichloroacetic acid solution. Subsequently, they are labeled with 0.04% Sulforhodamine B (SRB) in 1% acetic acid. After multiple washes to remove the excess dye, 100 μL of 50 mM Tris solution is added to each well in order to dissolve the dye. The absorbance of each well is read on a plate reader at 570 nm. Date are expressed as the percentage of survival of control calculated from the absorbance corrected for background absorbance. The surviving percent of cells is determined by dividing the mean absorbance values of the monoclonal antibody by mean absorbance values of the control and multiplying by 100.

• Dierlijke modellen

  Mice (athymic nude) xenograft models of HT-29, A549, and SB-CL2 cells

• Doseringen

  10 mg/kg–75 mg/kg (i.p.) or 50 mg/kg–200 mg/kg (p.o.)

• Toediening

  Oral gavage (qd5 × 3 weeks) or intraperitoneal injection (qd5 × 2 weeks)