KU-60019

Vergeleken met KU-55933 is KU-60019 een verbeterde remmer van het ATM-kinase, terwijl het een vergelijkbare doelselectiviteit vertoont. Deze verbinding heeft weinig activiteit tegen DNA-PKcs en ATR met IC50-waarden van respectievelijk 1,7 μM en >10 μM, evenals tegen 229 andere proteïnekinasen zoals PI3K, mTOR en mTOR/FKBP12. Het vertoont 3- tot 10-voudig meer potentie dan KU-55933 bij het blokkeren van stralingsgeïnduceerde fosforylering van belangrijke ATM-eiwitdoelen zoals p53, γ-H2AX en CHK2, in menselijke glioom U87- en U1242-cellen, aangezien 1 μM van deze remmer significant een afname van >70% van p53 (S15)-fosforylering induceert waarvoor ~10 μM KU-55933 nodig is. Deze chemische stof radiosensitiseert menselijke glioomcellen effectief met een dosisverhogingsverhouding van respectievelijk 1,7 en 4,4 bij 1 μM en 10 μM, en radiosensitiseert ook de normale fibroblasten, maar niet de A-T-fibroblasten. De behandeling (3 μM) blokkeert basale en insuline-geïnduceerde AKT S473-fosforylering met respectievelijk 70% en ~50%, en vermindert stralingsgeïnduceerde AKT-fosforylering volledig tot onder het controleniveau. Het effect van dit middel op AKT S473-fosforylering kan worden waargenomen in glioomcellijnen en normale fibroblasten, maar niet in A-T (h-TERT)-cellen, en kan significant worden geblokkeerd door fosfataseremmer okadaïnezuur, wat suggereert dat ATM-kinase een cruciale rol speelt bij het reguleren van AKT-fosforylering via een onbekende fosfatase. In overeenstemming met de remming van de overlevingsbevorderende AKT-signalering, remt het bij 3 μM significant de migratie en invasie van menselijke glioom U87-cellen met respectievelijk >70% en ~60%, evenals U1242-cellen met respectievelijk >50% en ~60%. [1]

In orthotopische glioom U1242/luc-GFP-xenograftmodellen verhoogt de combinatie van KU-60019 en straling de overleving van muizen significant meer dan dit middel alleen, straling alleen, of geen behandeling. Bovendien zijn p53-mutante gliomen veel gevoeliger voor deze chemische radiosensitisatie dan wild-type glioom. [2]

• Cellijnen

  U87 and U1242

• Concentraties

  Dissolved in water, final concentrations ~3 μM

• Incubatietijd

  1, 3, and 5 days

• Methode

  Cells are exposed to KU-60019 for 1, 3, and 5 days. Cell growth is determined by AlamarBlue. This compound is added to the medium to the recommended final concentration. Plates are incubated for 1 hour at 37 °C, fluorescence is determined on a Fluoro-Count plate reader (excitation 530 nm, emission 590 nm), and values are taken as a measure of cell growth. Cell survival is determined by trypan blue/fluorescence activated cell sorting (FACS) assay.

• Dierlijke modellen

  Athymic female mice harboring orthotopic glioma U1242/luc-GFP tumors or human glioma U1242/luc-GFP tumors

• Doseringen

  KU-60019 (10 μM) is delivered at a rate of 0.5 μL/h by osmotic pump; KU-60019 (250 μM) in 12.5 μL is infused by CED.

• Toediening

  Administered intratumorally by convection-enhanced delivery or osmotic pump