Hesperadin

CatalogusnummerS1529 Batch:S152902

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₂₉H₃₂N₄O₃S

Moleculair gewicht

516.65

CAS-nr.

422513-13-1

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (193.55 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	2.500mg/ml (4.84mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to make it clear; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

Hesperadin remt Aurora B potent met een IC50 van 250 nM in een celvrije assay. Het vermindert de activiteit van AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK aanzienlijk, terwijl het de MKK1-activiteit in vivo niet remt.

Doelen

TbAUK1 (Cell-free assay)	Aurora B (human) (Cell-free assay)
40 nM	250 nM

In vitro

Hesperadin remt het vermogen van geïmmunoprecipiteerde Aurora B om histon H3 te fosforyleren met een IC50 van 250 nM en vermindert de activiteit van andere kinasen (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK) aanzienlijk bij een concentratie van 1 μM. Daarentegen is slechts 20-100 nM van deze verbinding voldoende om het verlies van mitotische histon H3-Ser10-fosforylering in HeLa-cellen te induceren. De behandeling ervan veroorzaakt defecten in mitose en cytokinese, wat leidt tot het stoppen van de proliferatie van HeLa-cellen en polyploïdisatie, wat specifiek kan worden toegeschreven aan de remming van de Aurora B-functie tijdens het proces van chromosoombevestiging. Deze verbinding (100 nM) heft snel de mitotische arrestatie op die wordt geïnduceerd door taxol of monastrol, maar niet door nocodazol. De behandeling met deze verbinding en nocodazol in HeLa-cellen heft de kinetochoorlokalisatie van BubR1 op en vermindert de intensiteit van Bub1 bij kinetochoren, wat suggereert dat de Aurora B-functie vereist is voor efficiënte kinetochoorrekrutering van BubR1 en Bub1, wat op zijn beurt nodig zou kunnen zijn voor langdurige checkpoint-signalering. Het voorkomt de fosforylering van recombinant trypanosoomhiston H3 door de T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) van pathogene Trypanosoma brucei met een IC50 van 40 nM in in vitro kinaseassays. Dit chemische middel remt de celgroei van gekweekte infectieuze bloedbaanvormen (BF) significant met een IC50 van 48 nM, en remt de celgroei van insectenstadium procyclische vormen (PF) slechts zwak met een IC50 van 550 nM.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	De Aurora B kinase test Voor de Aurora B kinase test worden HeLa-cellen gelyseerd in een buffer met 50 mM NaCl. Het hele celextract wordt gedraaid bij 13.000 tpm gedurende 20 minuten bij 4 °C met behulp van een tafelcentrifuge. Het pellet verkregen uit 200 mg van het hele celextract wordt opnieuw geëxtraheerd in 15 ml lysisbuffer met 250 mM NaCl om actieve Aurora B kinase uit mitotisch chromatine te verkrijgen. Het supernatant met lage snelheid van het laatste extract wordt gebruikt voor immunoprecipitatie. Monoklonale muizenantistoffen anti-AIM-1, of muizenantistoffen anti-HA, worden gekoppeld aan GammaBind Plus Sepharose, en de beads worden gedurende 90 minuten bij 4 °C overeind in het extract gedraaid. De beads worden gewassen, gealiquoteerd en gewassen in kinasebuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). De kinase test wordt uitgevoerd met 10 μL beads in 20 μL kinasebuffer met 5 μg histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-³²P]ATP en verschillende concentraties van deze verbinding gedurende 20 minuten bij 37 °C. SDS-monsterbuffer wordt toegevoegd, en de monsters worden gekookt en gescheiden door SDS-PAGE. De gel wordt gedroogd en het radioactieve signaal wordt gedetecteerd door PhosphorImager-analyse. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van ImageQuant-software.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen HeLa cells and PtK1 cells Concentraties Final concentration ~500 nM Incubatietijd 24 and 48 hours Methode Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Kinase-assay:^{^[1]}

De Aurora B kinase test
Voor de Aurora B kinase test worden HeLa-cellen gelyseerd in een buffer met 50 mM NaCl. Het hele celextract wordt gedraaid bij 13.000 tpm gedurende 20 minuten bij 4 °C met behulp van een tafelcentrifuge. Het pellet verkregen uit 200 mg van het hele celextract wordt opnieuw geëxtraheerd in 15 ml lysisbuffer met 250 mM NaCl om actieve Aurora B kinase uit mitotisch chromatine te verkrijgen. Het supernatant met lage snelheid van het laatste extract wordt gebruikt voor immunoprecipitatie. Monoklonale muizenantistoffen anti-AIM-1, of muizenantistoffen anti-HA, worden gekoppeld aan GammaBind Plus Sepharose, en de beads worden gedurende 90 minuten bij 4 °C overeind in het extract gedraaid. De beads worden gewassen, gealiquoteerd en gewassen in kinasebuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). De kinase test wordt uitgevoerd met 10 μL beads in 20 μL kinasebuffer met 5 μg histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-³²P]ATP en verschillende concentraties van deze verbinding gedurende 20 minuten bij 37 °C. SDS-monsterbuffer wordt toegevoegd, en de monsters worden gekookt en gescheiden door SDS-PAGE. De gel wordt gedroogd en het radioactieve signaal wordt gedetecteerd door PhosphorImager-analyse. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van ImageQuant-software.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
HeLa cells and PtK1 cells
Concentraties
Final concentration ~500 nM
Incubatietijd
24 and 48 hours
Methode
Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12707311/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19320832/

Klantproductvalidatie

: Gegevens van [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: Gegevens van [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: ,

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Hesperadin Is geciteerd door 52 Publicaties

Homologous recombination promotes non-immunogenic mitotic cell death upon DNA damage [ Nat Cell Biol, 2025, 27(1):59-72]	PubMed: 39805921
A CPC-shelterin-BTR axis regulates mitotic telomere deprotection [ Nat Commun, 2025, 16(1):2277]	PubMed: 40097392
Identification of chemical inhibitors targeting long noncoding RNA through gene signature-based high throughput screening [ Int J Biol Macromol, 2025, 292:139119]	PubMed: 39722392
Rsk2 inhibition induces an aneuploid post-mitotic arrest of cell cycle progression in osteosarcoma cells [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):318]	PubMed: 40634321
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023]	PubMed: 40795355
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739]	PubMed: 39276350
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604]	PubMed: 38757760
Histone H3 phospho-regulation by KimH3 in both interphase and mitosis [ iScience, 2023, 26(4):106372]	PubMed: 37013187
Rsk2 and Lrp5 deficiency limit osteosarcoma growth in cFos-transgenic mice by different mechanisms [ ProQuest , 2023, 30683696]	PubMed: None
Hesperadin suppresses pancreatic cancer through ATF4/GADD45A axis at nanomolar concentrations [ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02328-4]	PubMed: 35551503

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.