GSK690693

GSK690693 is zeer selectief voor de Akt-isoformen ten opzichte van de meeste kinasen in andere families. Dit compound is echter minder selectief voor leden van de AGC-kinasefamilie, waaronder PKA, PrkX en PKC-isozymen, met een IC50 van respectievelijk 24 nM, 5 nM en 2-21 nM. Het remt ook krachtig AMPK en DAPK3 uit de CAMK-familie met een IC50 van respectievelijk 50 nM en 81 nM, en PAK4, 5 en 6 uit de STE-familie met een IC50 van respectievelijk 10 nM, 52 nM en 6 nM. Deze chemische stof remt de fosforylering van GSK3β in tumorcellen met een IC50 variërend van 43 nM tot 150 nM. De behandeling leidt tot een dosisafhankelijke toename van de nucleaire accumulatie van de transcriptiefactor FOXO3A. Dit compound remt krachtig de proliferatie van T47D-, ZR-75-1-, BT474-, HCC1954-, MDA-MB-453- en LNCaP-cellen met een IC50 van respectievelijk 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM en 147 nM. De behandeling induceert apoptose bij concentraties >100 nM in zowel LNCaP- als BT474-cellen. [1] In overeenstemming met de rol van AKT in celoverleving, induceert het apoptose in gevoelige ALL-cellijnen. [2]

Een enkele toediening van GSK690693 remt GSK3β-fosforylering in humane borstcarcinoom (BT474) xenografts op een dosis- en tijdsafhankelijke manier. Evenzo induceert dit compound een vermindering van de fosforylering van de Akt-substraten, PRAS40 en FKHR/FKHRL1. Het resulteert ook in een acute toename van de bloedglucose, die 8 tot 10 uur na medicijntoediening terugkeert naar de basislijn. Toediening van deze chemische stof induceert verminderingen in gefosforyleerde Akt-substraten in vivo en remt krachtig de groei van humane SKOV-3 ovarium-, LNCaP prostaat- en BT474- en HCC-1954 borstcarcinoom xenografts, met een maximale remming van 58% tot 75% bij een dosis van 30 mg/kg/dag. [1] Dit compound vertoont werkzaamheid, ongeacht het betrokken mechanisme van Akt-activering. Het is het meest effectief in het vertragen van tumorprogressie bij Lck-MyrAkt2-muizen die een membraangebonden, constitutief actieve vorm van Akt tot expressie brengen. [3]

• In vitro kinase-assays

  His-getagde full-length Akt1, 2 of 3 worden tot expressie gebracht en gezuiverd uit baculovirus. Activering wordt uitgevoerd met gezuiverde PDK1 om Thr308 te fosforyleren en gezuiverde MK2 om Ser473 te fosforyleren. Om de tijdsafhankelijke remming van Akt nauwkeuriger te meten, worden geactiveerde Akt-enzymen geïncubeerd met GSK690693 in verschillende concentraties bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten voordat de reactie wordt geïnitieerd met de toevoeging van substraat. De uiteindelijke reactie bevat 5 nM tot 15 nM Akt1, 2 en 3 enzymen; 2 μM ATP; 0,15 μCi/μL [γ-³³P]ATP; 1 μM peptide (Biotin-aminohexanoicacid-ARKR-ERAYSFGHHA-amide); 10 mM MgCl₂; 25 mM MOPS (pH 7,5); 1 mM DTT; 1 mM CHAPS; en 50 mM KCl. De reacties worden 45 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd, gevolgd door beëindiging met Leadseeker-parels in PBS met EDTA (uiteindelijke concentratie, 2 mg/mL parels en 75 mM EDTA). De platen worden vervolgens verzegeld, de parels mogen ten minste 5 uur bezinken en de productvorming wordt gekwantificeerd met behulp van een Viewlux Imager.

• Cellijnen

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• Dierlijke modellen

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• Doseringen

  ~30 mg/kg/day

• Toediening

  Administered via i.p.