Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275)

CatalogusnummerS1230 Batch:S123008

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C21H20ClNO5
Moleculair gewicht 401.84 CAS-nr. 146426-40-6
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 30 mg/mL (74.65 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Flavopiridol (Alvocidib) concurreert met ATP om CDK's te remmen, waaronder CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 en CDK9 met IC50-waarden in het bereik van 20-100 nM. Het is selectiever voor CDK1, 2, 4, 6, 9 versus CDK7. Flavopiridol bleek aanvankelijk EGFR en PKA te remmen. Flavopiridol induceert autophagy en ER-stress. Flavopiridol blokkeert HIV-1-replicatie. Fase 1/2.
Doelen
CDK9
(Cell-free assay)		 CDK1
(Cell-free assay)		 CDK4
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 CDK6
(Cell-free assay)		 Meer bekijken
20 nM 30 nM 20-40 nM 40 nM 60 nM
In vitro Flavopiridol (Alvocidib) vertoont minder activiteit tegen niet-verwante kinasen zoals MAP, PAK, PKC en EGFR met een IC50 van >14 μM. Het remt significant de kolonie groei van HCT116, A2780, PC3 en Mia PaCa-2 cellen met IC50 van respectievelijk 13 nM, 15 nM, 10 nM en 36 nM. Deze verbinding remt ook potent de activiteit van Glycogeen synthase kinase-3 (GSK-3) met een IC50 van 280 nM. In vergelijking met andere CDK's remt het de activiteit van CDK7 minder potent met een IC50 van 875 nM. Bij 0.5 μM remt het zowel pSer807/811 Rb als pThr199 NPM, terwijl milde veranderingen worden waargenomen bij pThr821 Rb. Het verlaagt ook het algehele RNA polymerase II niveau, evenals de fosforylering van RNA polymerase II op de CTD-herhalingen bij Ser2 Ser5. Als een breed-spectrum CDK-remmer kan het de Cell Cycle progressie remmen in zowel G1 als G2. Bij 0.3 μM induceert het G1-arrest in MCF-7 of MDA-MB-468 cellen door remming van de CDK4 of CDK2 kinase-activiteit. Het vertoont potente cytotoxiciteit tegen een breed scala aan tumorcellijnen met IC50-waarden variërend van 16 nM voor LNCAP tot 130 nM voor K562.
In vivo Toediening van S1230 in een dosis van 7,5 mg/kg gedurende 7 dagen vertoont een lichte antitumoractiviteit tegen P388 murine leukemie, wat resulteert in een %T/C-waarde van 110, en is actief tegen het humane A2780 ovariumcarcinoom dat subcutaan is geïmplanteerd in naakte muizen, wat resulteert in 1,5 log celvernietiging (LCK). Behandeling met S1230 in een dosis van 1-2,5 mg/kg gedurende 10 dagen onderdrukt significant collageen-geïnduceerde artritis bij muizen op een dosisafhankelijke manier, door synoviale hyperplasie en gewrichtsdestructie te remmen, terwijl serumconcentraties van anti-collageen type II (CII) Abs en proliferatieve reacties op CII behouden blijven. In de p21-intacte Hct116 xenografts in naakte muizen remt toediening van CPT-11 (100 mg/kg) gevolgd door S1230 (3 mg/kg) 7 en 16 uur later de tumorregressie significant met respectievelijk 86% en 82%, wat een >2-voudige remming vertoont in vergelijking met CPT-11 alleen met 40%. De combinatie produceert een compleet responspercentage (CR) van ~30%, in tegenstelling tot CPT-11 alleen waarbij geen CR wordt gevonden.
Kenmerken Eerste CDK-remmer die in klinische proeven bij mensen werd gebruikt.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • CDK kinase-test

    Voor de CDK1/cycline B1 kinase-test bestaan de kinase-reacties uit 100 ng van baculovirus-uitgedrukt GST-CDK1/cycline B1 (humaan) complex, 1 μg histone HI, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 25 μM ATP in 50 μL kinase-buffer (50 mM Tris, pH 8.0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,5 mM DTT). Voor de CDK2/cycline E kinase-test bestaan de kinase-reacties uit 5 ng van baculovirus-uitgedrukt GST-CDK2/cycline E (humaan) complex, 0,5 μg GST-RB fusie-eiwit (aminozuren 776-928 van retinoblastoma-eiwit), 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 25 μM ATP in 50 μL kinase-buffer (50 mM Hepes, pH 8.0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Voor de CDK4/cycline D1 kinase-test bestaan de kinase-reacties uit 150 ng van baculovirus-uitgedrukt GST-CDK4/cycline D1 (humaan), 280 ng Stag-cycline D1, 0,5 μg GST-RB fusie-eiwit (aminozuren 776-928 van retinoblastoma-eiwit), 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 25 μM ATP in 50 μL kinase-buffer (50 mM Hepes, pH 8.0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Reacties worden 45 minuten voor CDK1 en CDK2, of 1 uur voor CDK4 bij 30 °C geïncubeerd en gestopt door toevoeging van koud trichloorazijnzuur (TCA) tot een eindconcentratie van 15%. TCA-precipitaten worden verzameld op GF/C unifilterplaten met behulp van een Filtermate universele harvester en de filters worden gekwantificeerd met behulp van een TopCount 96-well vloeistofscintillatieteller. Flavopiridol (Alvocidib) wordt opgelost in 10 mM dimethylformamide (DMF) en geëvalueerd bij zes concentraties, elk in drievoud. De uiteindelijke concentratie DMF in de test = 2%. IC50-waarden worden afgeleid door niet-lineaire regressieanalyse en hebben een variatiecoëfficiënt = 16%. Om de activiteit op CDK6 te testen, wordt een filterbindingsassay opgezet. De volgende componenten worden gecombineerd in het reactiemengsel: 2 μL CDK6 (0,7 mg/μL), 5 μL histone H1 (6 mg/mL), 14 μL kinasebuffer (60 mM β-glycerofosfaat, 30 mM p-nitrofenylfosfaat, 25 mM MOPS (pH 7.0), 5 mM EGTA, 15 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,1 mM Na-vanadate), 3 μL toenemende concentraties van deze verbinding verdund in 50% DMSO, en 6 μL 33P-ATP (1 mCi/mL) in niet-radioactief ATP bij 90 μM concentratie (eindconcentratie: 15 μM). De assay wordt gestart door toevoeging van 33P-ATP. De reactie wordt 20 minuten bij 30°C geïncubeerd. Een 25 μL aliquot van het supernatant wordt vervolgens op Whatman P81 fosfocellulosepapier gespot. Filters worden 5 keer gewassen met 1% fosforzuuroplossing. Natte filters worden geteld in aanwezigheid van 1 mL scintillatievloeistof. Cdk9-activiteit wordt gemeten met 50 nM recombinant Cdk9/cyclin T in 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 150 μM RNA polymerase CDT-peptide en 80 μM ATP. Cdk7-assay wordt uitgevoerd in dezelfde buffer met 37 nM gezuiverde kinase in aanwezigheid van 200 μM ATP en 10 μM myelinebindend eiwit als substraat. De potentie van het middel voor CDK9 en CDK7 wordt bepaald met behulp van een sterke anionenwisselaar (Dowex 1-X8 hars, formiaatvorm) -gebaseerde assay of een scintillatieproximiteitsassay. IC50-waarden worden berekend uit de dosis-respons-curven.
Celassay:

[5]
  • Cellijnen

    MCF-7, LNCAP, PC3, HCT116, CACO-2, A549, HL60, K562 cells and et al.

  • Concentraties

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Incubatietijd

    72 hours

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Flavopiridol (Alvocidib) for 72 hours, at which time the tetrazolium dye, MTS in combination with phenazine methosulfate, is added. After 3 hours, the absorbency is measured at 492 nm, which is proportional to the number of viable cells. The results are expressed as IC50 values. For cell cycle analysis, cells are fixed in paraformaldehyde and ethanol, washed, resuspended in a staining solution of TdT enzyme and FITC-dUTP, washed, stained with PI following RNase treatment, and then analyzed by flow cytometry.
Dierstudie:

[5]
  • Dierlijke modellen

    Female Balb/c×DBA/2J F1 mice inoculated ip with P388 ascites leukemic cells, and Balb/c nu/nu nude mice subcutaneous implanted with A2780, Br-cycE, or A431 cells

  • Doseringen

    ~7.5 mg/kg/day

  • Toediening

    Injection i.p.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11063609/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15689157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8674031/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12190313/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18209094/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11751522/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11311660/

Klantproductvalidatie

<p>(C) In vivo treatment of Tg:Pomc-Pttg;Pomc-eGFP embryos with small-molecule CDK inhibitors (50 μM) or 0.2% DMSO as control from 18 to 40 hpf. One hundred to one hundred fifty embryos were treated with each compound. Representative images of live embryos are shown with gross morphology (Right) and pituitary Pomc-GFP-positive cells at higher magnification (Left) at 40 hpf. Embryos exposed to flavopiridol developed early developmental defect before pituitary POMC cell ontogeny occurs. (D) Relative expression of pituitary Pomc-eGFP fluorescence analyzed using Volocity 5.2 software (Improvision; mean ±SE of relative expression, n = 7). (E) R-roscovitine specifically suppresses expansion of pituitary POMC cells overexpressing zPttg from 18 to 48 hpf. Double transgenic Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos were generated by breeding Tg:Pomc-Pttg fish with a previously generated PRL-RFP transgenic line, in which RFP was targeted to pituitary lactotrophs by a zebrafish Prolactin promoter (34). Representative fluorescent microscopy of pituitary POMC-eGFP (a and b) and PRL-RFP (c and d) expression in live Tg:Pomc-Pttg; Pomc-eGFP and Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos treated with 0.2% DMSO (a and c) or 50 μM R-roscovitine (b and d). (F) Relative expression of pituitary POMC-eGFP or PRL-RFP fluorescence were analyzed (mean ±SE of relative expression; n = 10). Results represent one of three similar experiments;*P < 0.02 and **P < 0.000005. (Scale bar, 50 μm.)</p>

Gegevens van [ PNAS , 2011 , 108, 8417 ]

(A) After mitotic arrest and treatment with the proteasome inhibitor MG132, HeLa cells were treated with the indicated kinase inhibitors The cells were harvested, and the lysates were separated by SDS-PAGE and immunoblotted for phosphorylated RV[S/T]F (p-RV[S/T]F, top). The blot was quantified using ImageJ software and normalized to the mitotic sample (bottom). MLN8054, Aurora A and Aurora B inhibitor; ZM447439 and hesperadin, Aurora B inhibitors; BI2536, PLK1 inhibitor; flavopiridol, CDK1 inhibitor. n = 3. **P < 0.01, paired Student’s t test.

Gegevens van [ , , Science, 2018, 11(530), doi: 10.1126/scisignal.aai8669 ]

G, human THP-1 cells were treated with various small-molecule inhibitors or chemotherapy at increasing concentrations for 24 hours and then analyzed for viability by flow cytometry for PI exclusion. Cells concurrently treated with palbociclib or dinaciclib were analyzed for cytostatis according to nuclear DNA content.

Gegevens van [ , , Cancer Res, 2016, 76(5):1158-69 ]

UM cell lines OMM1, MM66, OMM2.3, MEL202 and MEL270 were treated with 20 nM quisinostat and 100 nM flavopiridol for 24 hours after which cells were harvested. Protein lysates were analyzed for the expression levels of c-Myc, RNA pol2-CTD Ser2 phosphorylation and acetylated histone 3 by Western blot. Expression of vinculin was analyzed to control for equal loading.

Gegevens van [ , , Oncotarget, 2018, 9(5): 6174-6187 ]

Sellecks Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275) Is geciteerd door 149 Publicaties

SLFN11-mediated ribosome biogenesis impairment induces TP53-independent apoptosis [ Mol Cell, 2025, S1097-2765(25)00042-5] PubMed: 39909041
Combined therapy with DR5-targeting antibody-drug conjugate and CDK inhibitors as a strategy for advanced colorectal cancer [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00231-9] PubMed: 40449480
Maternal CENP-C restores centromere symmetry in mammalian zygotes to ensure proper chromosome segregation [ Dev Cell, 2025, S1534-5807(25)00537-4] PubMed: 40997799
Identification of modulators of the ALT pathway through a native FISH-based optical screen [ Cell Rep, 2025, 44(1):115114] PubMed: 39729394
Identifying Age-Modulating Compounds Using a Novel Computational Framework for Evaluating Transcriptional Age [ Aging Cell, 2025, e70075] PubMed: 40307992
Protection of infant mice against pertussis, tuberculosis and influenza by co-administration of nasal pertussis vaccine candidate BPZE1 and BCG [ iScience, 2025, 28(7):112839] PubMed: 40612502
Replication-competent adenovirus reporters utilizing endogenous viral expression architecture [ J Virol, 2025, 99(10):e0114625] PubMed: 40928252
BET degraders reveal BRD4 disruption of 7SK and P-TEFb is critical for effective reactivation of latent HIV in CD4+ T-cells [ J Virol, 2025, 99(4):e0177724] PubMed: 40067013
Repurposing flavopiridol as an inhaled therapeutic for pulmonary fibrosis [ Eur J Pharmacol, 2025, 1005:178058] PubMed: 40816528
Bacterial ubiquitin ligase engineered for small molecule and protein target identification [ bioRxiv, 2025, 2025.03.20.644192] PubMed: 40166235

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.