Patupilone (Epothilone B)

Patupilone (Epothilone B) vertoont een betere activiteit dan Epothilone A, met een EC_0.01 van 1,8 μM. Het remt potent de celproliferatie in HCT116-cellen, met een IC50 van 0,8 nM. [1] Deze verbinding induceert mitotische arrest en vertoont cytotoxiciteit in KB3-1-, KBV-1-, Hela- en Hs578T-cellen, met een IC50 van 3 nM tot 92 nM. Het concurreert met Taxol in binding aan microtubuli, met een IC50 van 3,3 μM. [2] In MCF-7-cellen die GFP-α-tubuline overexpressen, blokkeert het (3,5 nM) efficiënt de microtubulusdynamiek. Ondertussen induceert het mitotische arrest met een IC50 van 3,5 nM. [3] In multipel myeloom (MM)-cellen, waaronder RPMI 8226, U266, MM.1S, LR5 en MR20, onderdrukt het direct de proliferatie met een IC50 van 1 nM tot 10 nM. Op vergelijkbare wijze induceert het (10 nM) ook celcyclusarrest en apoptose. [4] Een recente studie onthult dat het, in ovariumkanker Hey-cellen, (5 nM–100 nM) het oppervlakte-epitheelceladhesie-antigeen (EpCAM) versterkt, zonder de transcriptie of het totale cellulaire niveau van EpCAM te beïnvloeden. [5]

In een muizenxenograftmodel van RPMI 8226-cellen verlengt Patupilone (Epothilone B) (2,5 mg/kg–4 mg/kg) de overleving en onderdrukt het de tumorgroei. [4] Op vergelijkbare wijze remt deze verbinding in dezelfde dosis ook de tumorgroei in muizenxenograftmodellen van prostaatkankercellen, waaronder DU145 en PC3. [6]

• Tubulinepolymerisatie assay

  Kalfsbrein microtubulusproteïnen (MTP) worden gezuiverd, wat ongeveer 15%–20% microtubulus-geassocieerde proteïnen omvat. De buffer (MES-buffer) die wordt gebruikt voor de Epothilone B-microtubulusstudies bevat 0,1 M 2-morfolinoethaansulfonzuur (MES), 1 mM EGTA en 0,5 mM MgCl₂ bij pH 6,6. Monsters voor elektronenmicroscopie worden op met koolstof-over-Parlodion gecoate roosters (300 mesh) geplaatst en negatief gekleurd met 2% uranylacetaat. Microtubulusassemblage in aanwezigheid of afwezigheid van Patupilone (Epothilone B) wordt spectrofotometrisch gecontroleerd met behulp van een spectrofotometer uitgerust met een thermostatisch gereguleerde vloeistofcirculator. De temperatuur wordt op 35 °C gehouden en veranderingen in troebelheid (representatief voor polymeermassa) worden gemeten bij 350 nm. Effectieve concentratie (EC_0.01), gedefinieerd als de geïnterpoleerde concentratie die een initiële helling van 0,01 OD/min kan induceren, wordt berekend met behulp van de formule EC_0.01 = concentratie/helling en uitgedrukt als het gemiddelde met standaardafwijking verkregen uit drie verschillende concentraties.

• Cellijnen

  KB3-1, KBV-1, Hela, and Hs578T cells

• Concentraties

  0–1 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, they are treated with Patupilone (Epothilone B) and scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2/M transition and aberrant mitosis.

• Dierlijke modellen

  Mice xenograft model of RPMI 8226 cells

• Doseringen

  2.5 mg/kg–4 mg/kg

• Toediening

  Inject intravenously