CP-466722

CatalogusnummerS2245 Batch:S224501

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₁₇H₁₅N₇O₂

Moleculair gewicht

349.35

CAS-nr.

1080622-86-1

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

4-Methylpyridine (verwarmd met een waterbad van 50 ºC)

5 mg/mL (14.31 mM)

DMSO

0.28 mg/mL (0.8 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Clear solution

5%4-Methylpyridine 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

0.1mg/ml (0.29mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified 4-Methylpyridine stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

CP-466722 is een potente en reversibele ATM-remmer, beïnvloedt ATR niet en remt PI3K- of PIKK-familieleden in cellen.

Doelen

ATM

410 nM

In vitro

In vitro wordt CP-466722 geïdentificeerd als een potentiële remmer om de activiteit van gezuiverde ATM-kinase te verminderen om GST-p53(1–101) substraat te fosforyleren. Bovendien vertoont deze verbinding ook remmende activiteiten tegen abl- en src-kinases. In HeLa-cellen resulteert deze verbinding bij doses van 6 μM in de remming van ATM-afhankelijke fosforylatie door ioniserende straling (IR)-geïnduceerde ATM-kinaseactiviteit reversibel te remmen. Bovendien wordt ATM-afhankelijke p53-inductie ook geremd door deze chemische stof in MCF-7 menselijke borstkankercellen en primaire en geïmmortaliseerde diploïde menselijke fibroblasten. Als reactie op IR verhoogde deze verbinding het percentage cellen met G2/M DNA-gehalte en verminderde het percentage cellen met G1-fase DNA-gehalte in HeLa-cellen. Tijdelijke blootstelling aan deze chemische stof gedurende 4 uur sensibiliseert HeLa-cellen voor IR zonder de celuitplatering of cellevensvatbaarheid te beïnvloeden.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	In vitro kinase assays Om kleine molecuulremmers van ATM-kinaseactiviteit te screenen, wordt een in vitro kinase-assay aangepast en wordt een ELISA-assay ontwikkeld die de fosforyleringsstatus van het ATM-downstreamdoelwit p53 meet. Recombinant GST-p53(1-101) en full-length Flag-getagde ATM & ATR worden gezuiverd voor gebruik in de ELISA- en in vitro kinase-assays. Kortom, Nunc 96-well Maxisorp-platen worden 's nachts (4 °C) gecoat met 2 μg gezuiverd, recombinant GST-p53(1-101) in PBS. Alle daaropvolgende incubaties worden bij kamertemperatuur uitgevoerd. De platen worden gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS) voordat gezuiverde recombinant full-length ATM-kinase (30 ng–60 ng) wordt toegevoegd in een eindvolume van 80 μL reactiebuffer (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT en 1 μM ATP) in aanwezigheid of afwezigheid van CP-466722. Deze verbinding (10 μM) wordt dubbel aan de platen toegevoegd en de kinase-assay wordt geïncubeerd (90 minuten). Platen worden gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS), geblokkeerd (1 uur, 1%w/v-BSA/PBS) en gespoeld voordat anti-Phospho(Ser15)-p53-antilichaam (1:1000/PBS) aan de platen wordt toegevoegd en geïncubeerd (1 uur). Om niet-specifieke binding te verminderen, worden platen gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS) voorafgaand aan incubatie (1 uur) met HRP-geconjugeerde geit anti-konijn IgG secundaire antilichaam (1:5000/PBS). Secundair antilichaam dat is gekoppeld aan het gefosforyleerde GST-p53(1–101) eiwit wordt gedetecteerd met TMB-substraat reagens. Platen worden ontwikkeld (15 minuten–30 minuten) en de reactie wordt gestopt (1 M H₂SO₄ eindconcentratie) voordat de absorptie wordt bepaald (λ450nm). Deze verbinding die de ATM-kinaseactiviteit remt in ELISA-assays, wordt gekarakteriseerd met betrekking tot remming van ATM/ATR-kinases met behulp van in vitro kinase-assays. Western blotting met behulp van het anti-Phospho(Ser15)-p53 antilichaam wordt gebruikt als een uitlezing van ATM/ATR-remming. Uitgebreide analyse van deze chemische stof (10 μM) tegen een commercieel verkrijgbaar panel van kinases wordt uitgevoerd door Upstate.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen HeLa and A-T Concentraties 0-6 μM Incubatietijd 4 hours Methode HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Kinase-assay:^{^[1]}

In vitro kinase assays
Om kleine molecuulremmers van ATM-kinaseactiviteit te screenen, wordt een in vitro kinase-assay aangepast en wordt een ELISA-assay ontwikkeld die de fosforyleringsstatus van het ATM-downstreamdoelwit p53 meet. Recombinant GST-p53(1-101) en full-length Flag-getagde ATM & ATR worden gezuiverd voor gebruik in de ELISA- en in vitro kinase-assays. Kortom, Nunc 96-well Maxisorp-platen worden 's nachts (4 °C) gecoat met 2 μg gezuiverd, recombinant GST-p53(1-101) in PBS. Alle daaropvolgende incubaties worden bij kamertemperatuur uitgevoerd. De platen worden gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS) voordat gezuiverde recombinant full-length ATM-kinase (30 ng–60 ng) wordt toegevoegd in een eindvolume van 80 μL reactiebuffer (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT en 1 μM ATP) in aanwezigheid of afwezigheid van CP-466722. Deze verbinding (10 μM) wordt dubbel aan de platen toegevoegd en de kinase-assay wordt geïncubeerd (90 minuten). Platen worden gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS), geblokkeerd (1 uur, 1%w/v-BSA/PBS) en gespoeld voordat anti-Phospho(Ser15)-p53-antilichaam (1:1000/PBS) aan de platen wordt toegevoegd en geïncubeerd (1 uur). Om niet-specifieke binding te verminderen, worden platen gewassen (0,05%v/v-Tween/PBS) voorafgaand aan incubatie (1 uur) met HRP-geconjugeerde geit anti-konijn IgG secundaire antilichaam (1:5000/PBS). Secundair antilichaam dat is gekoppeld aan het gefosforyleerde GST-p53(1–101) eiwit wordt gedetecteerd met TMB-substraat reagens. Platen worden ontwikkeld (15 minuten–30 minuten) en de reactie wordt gestopt (1 M H₂SO₄ eindconcentratie) voordat de absorptie wordt bepaald (λ450nm). Deze verbinding die de ATM-kinaseactiviteit remt in ELISA-assays, wordt gekarakteriseerd met betrekking tot remming van ATM/ATR-kinases met behulp van in vitro kinase-assays. Western blotting met behulp van het anti-Phospho(Ser15)-p53 antilichaam wordt gebruikt als een uitlezing van ATM/ATR-remming. Uitgebreide analyse van deze chemische stof (10 μM) tegen een commercieel verkrijgbaar panel van kinases wordt uitgevoerd door Upstate.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
HeLa and A-T
Concentraties
0-6 μM
Incubatietijd
4 hours
Methode
HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794134/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24464432/

Klantproductvalidatie

: Gegevens van [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Gegevens van [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Gegevens van [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

: Gegevens van [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

Sellecks CP-466722 Is geciteerd door 11 Publicaties

Loss of N-Glycanase 1 Alters Transcriptional and Translational Regulation in K562 Cell Lines [ G3 (Bethesda), 2020, 4;10(5):1585-1597]	PubMed: 32265286
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
An Anticancer Drug Cocktail of Three Kinase Inhibitors Improved Response to a Dendritic Cell-Based Cancer Vaccine [ Cancer Immunol Res, 2019, 7(9):1523-1534]	PubMed: 31266784
Upregulation of long noncoding RNA SNHG20 promotes cell growth and metastasis in esophageal squamous cell carcinoma via modulating ATM-JAK-PD-L1 pathway [ J Cell Biochem, 2019, 10.1002/jcb.28444]	PubMed: 30767270
Alleviation of Senescence via ATM Inhibition in Accelerated Aging Models. [ Mol Cells, 2019, 42(3):210-217]	PubMed: 30726661
ATM‑JAK‑PD‑L1 signaling pathway inhibition decreases EMT and metastasis of androgen‑independent prostate cancer. [ Mol Med Rep, 2018, 17(5):7045-7054]	PubMed: 29568923
Simultaneous targeting of ATM and Mcl-1 increases cisplatin sensitivity of cisplatin-resistant non-small cell lung cancer [ Cancer Biol Ther, 2017, 18(8):606-615]	PubMed: 28686074
Monitoring the Activation of the DNA Damage Response Pathway in a 3D Spheroid Model. [Mondesert O, et al. PLoS One, 2015, 10(7):e0134411]	PubMed: 26225756
ATM inhibitor KU-55933 increases the TMZ responsiveness of only inherently TMZ sensitive GBM cells. [Nadkarni A, et al. J Neurooncol, 2012, 110(3):349-57]	PubMed: 23054561

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.