Canertinib (CI-1033)

Canertinib (CI-1033) vertoont een uitstekende potentie voor irreversibele remming van erbB2 autofosforylering in MDA-MB 453-cellen, en toont ook een hoge permeabiliteit in Caco-2-cellen. [1] Deze verbinding alleen onderdrukt constitutief geactiveerde Akt en MAP kinase significant, en in combinatie remt het Akt terwijl het verhoogde niveaus van MAPK-fosforylering voorkomt. Het stimuleert p27-expressie en p38-fosforylering in MDA-MB-453-cellen. [2] CI-1033 is zeer specifiek voor de erbB-receptorfamilie en niet gevoelig voor PGFR, FGFR of IR, zelfs niet bij 50 μM. Het vertoont hoge niveaus van remming in A431-cellen die EGFR tot expressie brengen met een IC50 van 7,4 nM, en onderdrukt hereguline-gestimuleerde tyrosinefosforylering van erbB2, erbB3 en erbB4 met IC50 van respectievelijk 5, 14 en 10 nM. De verbinding remt ook de expressie van pp62^c-fos als reactie op hereguline. [3] Het wordt voorspeld Cys773 covalent te modificeren binnen de ATP-bindingsplaats van het HER2-kinase en versterkt de afbraak van zowel volwassen als onvolgroeide ErbB-2-moleculen. [4] Deze verbinding induceert een significante afname van meetbare fosforylering van tyrosineresiduen 845 en 1068 van EGFR, die respectievelijk verantwoordelijk zijn voor Src- en Ras/MAPK-signalering. De corresponderende residuen van Her-2, tyrosineresiduen 877 en 1248, worden significant gedefosforyleerd door het bij een concentratie van 3 μM of hoger. CI zou EGFR-internalisatie kunnen blokkeren en de snelheid van apoptose in primaire osteosarcoomcellen op een titreerbare manier kunnen verhogen. [5] Bovendien remt het de proliferatie van TT-, TE2-, TE6- en TE10-cellen significant bij 0,1 nM. [6]

Canertinib (CI-1033) vertoont indrukwekkende activiteit tegen A431-xenografts in naakte muizen bij 5 mg/kg lichaamsgewicht. [1] Deze verbinding (20 tot 80 mg/kg/dag) bewerkstelligt een hoge mate van tumorregressies in H125-xenograftmodellen. [3] De orale toediening ervan veroorzaakt een duidelijke groeiremming in TT-, TE6- en TE10-xenografts in naakte muizen, zonder diersterfte en <10% gewichtsverlies. [6]

• Tyrosine Kinase Assays

  Enzymassays voor de bepaling van IC50 worden uitgevoerd in 96-well filterplaten in een totaal volume van 0,1 ml, met 20 mM Hepes, pH 7,4, 50 mM natriumvanadaat, 10 μM ATP met 0,5 mCi [³²P]ATP, 20 mg polyglutaminezuur/tyrosine, 10 ng EGFR tyrosine kinase, en geschikte verdunningen van Canertinib (CI-1033). Alle componenten behalve het ATP worden aan de put toegevoegd en de plaat wordt gedurende 10 min bij 25 °C schuddend geïncubeerd. De reactie wordt gestart door [³²P]ATP toe te voegen, en de plaat wordt nog eens 10 min bij 25 °C geïncubeerd. De reactie wordt beëindigd door 0,1 ml 20% trichloorazijnzuur (TCA) toe te voegen. De plaat wordt minstens 15 min bij 4 °C bewaard om het substraat te laten precipiteren. De putten worden vervolgens vijf keer gewassen met 0,2 ml 10% TCA en de 32P-incorporatie wordt bepaald met een Wallac β-plaatenteller.

• Cellijnen

  TT, TE2, TE6 and TE10 cells

• Concentraties

  0.1-5.0 nM

• Incubatietijd

  1, 3, 5 and 7 days

• Methode

  Cells (1 × 10⁴) are seeded in each well of a 24-well plastic culture plate and left overnight in DMEM or RPMI-1640 supplemented with 10% FBS. The next morning, the cells are treated with the indicated concentrations of Canertinib (CI-1033) (0.1-5.0 nM) for varying periods (1, 3, 5 and 7 days). After treatment, the cells are counted using a Coulter counter. The percent of cell proliferation is calculated by this formula: treatment cell number/control cell number × 100 for each time period.

• Dierlijke modellen

  A431 xenografts established in nude mice

• Doseringen

  ~18 mg/kg

• Toediening

  Administered orally