In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
Tosedostat (CHR2797) is een aminopeptidase-remmer voor LAP, PuSA en Aminopeptidase N met IC50 van respectievelijk 100 nM, 150 nM en 220 nM, en remt PILSAP, MetAP-2, LTA4 hydrolase of MetAP-2 niet effectief. Fase 2.
Doelen
LAP
PuSA
Aminopeptidase N
100 nM
150 nM
220 nM
In vitro
CHR-2797 heeft vrijwel geen effect op de Aminopeptidase B, PILSAP, LTA4 hydrolase en MetAP-2 activiteit met IC50-waarden van respectievelijk >1 uM, >5 uM, >10 uM en >30 uM. CHR-2797 wordt in cellen omgezet in een farmacologisch actief zuurproduct (CHR-79888), dat een significante remmende activiteit vertoont tegen LTA4 hydrolase met een IC50 van 8 nM. CHR-2797 vertoont diepgaande anti-proliferatieve effecten tegen een reeks kankercellijnen zoals U-937, HL-60, KG-1 en GDM-1 met IC50-waarden van respectievelijk 10 nM, 30 nM, 15 nM en 15 nM, maar is inactief tegen HuT 78 en Jurkat E6-1 met IC50-waarden van >10 uM. Er is geen duidelijke correlatie tussen gevoeligheid voor CHR-2797 en de mutationele status van p53, PTEN of K-Ras in cellen. CHR-2797 toont selectiviteit voor getransformeerde cellen (MrC5-SV2 of K-ras NRK) boven niet-getransformeerde cellen (MrC5 of NRK). Behandeling met CHR-2797 (6 μM) leidt tot de opregulatie van genen die betrokken zijn bij aminozuurtransport en metabolische routes, de fosforylering van eukaryote initiatiefactor 2α, de remming van fosforylering van mTOR-substraten en verminderde eiwitsynthese in HL-60 cellen.
In vivo
Toediening van CHR-2797 (~100 mg/kg) vermindert tumorgroei in vivo, vergeleken met controles, op een dosis-responsieve manier in het rat HOSP.1 longkolonisatiemodel, het rat HSN LV10 chondrosarcoom leverkolonisatiemodel, het humane MDA-MB-435 borstkanker spontane metastasemodel en het humane MDA-MB-468 cel xenograftmodel.
LAP-activiteit wordt bepaald door de hydrolyse van het tripeptide, LGG, te meten, dat wordt gedetecteerd door het derivatiseringsreagens OPA in aanwezigheid van β-mercapto-ethanol. De test wordt uitgevoerd in 96-well testplaten. Wells bevatten verdund CHR-2797 (5 μL), 10 μg/mL LAP (5 μL) en 40 μL van 0,5 mM LGG. De plaat wordt kort geschud en gedurende 90 minuten bij 37 °C geïncubeerd. De reactie wordt beëindigd door toevoeging van 200 μL OPA/β-Mercapto-ethanol per well. De plaat wordt afgelezen op de Victor Wallac3 plaatlezer: excitatie, 355nm en emissie, 460nm. PuSA-activiteit wordt bepaald met behulp van het fluorogene substraat Ala-AMC. Incubatiemix bevat verdund CHR-2797 (20 μL), substraat (125 μM Ala-AMC in 0,125 M Tris-HCl buffer, pH 7,5; 40 μL) en enzym (40 μL). Na incubatie gedurende 2 uur bij 37 °C wordt de reactie gestopt door toevoeging van 100 μL 3% (v/v) azijnzuur. Fluorescentie wordt gemeten met een SLT Fluostar fluorimeter. Aminopeptidase N wordt getest met behulp van het fluorogene substraat, Ala-AMC. Incubatiemix bevat verdund CHR-2797 (20 μL), substraat (40 μL; eindconcentratie, 60 μM) en enzym (40 μL, 1:8000 verdunning) en wordt 60 minuten bij 37 °C geïncubeerd voorafgaand aan de toevoeging van 100 μL 3% (v/v) azijnzuur, om de reactie te stoppen. Fluorescentie wordt gemeten met een SLT Fluostar fluorimeter.
Cells are exposed to different concentrations of CHR-2797 for 72 hours. During the final 4 hours of this incubation, cells are pulsed with 0.4 μCi/well of [3H]thymidine (specific activity, 5 mCi/mmol), harvested onto GF/C glass fiber filter mats using a Tomtec harvester, and counted on a 1450 MicroBeta scintillation counter to determine the amount of [3H]thymidine incorporated into cellular DNA. Inhibition of the proliferation of human cancer cell lines is measured by [3H]thymidine incorporation.
Female rats (CBH/cbi) injected i.v. with HOSP.1P cells, male (CBH/cbi) rats injected with HSN LV10 cells, and nude mice (MF1 (nu/nu) inoculated with MDA-MB 435 cells or MDA-MB-468 cells
Doseringen
~100 mg/kg
Toediening
Dosed daily p.o.
Referenties
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18701491/
Sellecks Tosedostat (CHR2797) Is geciteerd door 3 Publicaties
Predicting effective pro-apoptotic anti-leukaemic drug combinations using co-operative dynamic BH3 profiling
[ PLoS One, 2018, 13(1):e0190682]
Response of Single Leukemic Cells to Peptidase Inhibitor Therapy Across Time and Dose Using a Microfluidic Device
[Kovarik ML ,et al. Integr Biol, 2014, 6(2):164-74]
Microfluidic chemical cytometry of peptide degradation in single drug-treated acute myeloid leukemia cells.
[Kovarik ML, et al. Anal Chem, 2013, 85(10):4991-7]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
