Daclatasvir (BMS-790052)

CatalogusnummerS1482 Batch:S148203

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C40H50N8O6
Moleculair gewicht 738.88 CAS-nr. 1009119-64-5
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Daclatasvir (BMS-790052, EBP883) is een zeer selectieve remmer van HCV NS5A met een EC50 van 9-50 pM, voor een breed scala aan HCV-replicon-genotypen en het JFH-1 genotypen 2a infectieuze virus in celkweek. Fase 3.
Doelen
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
In vitro Daclatasvir (BMS-790052) is een van de meest potente remmers van HCV-replicatie die tot nu toe zijn gerapporteerd. De gemiddelde EC50-waarden van deze verbinding zijn 50 en 9 pM voor respectievelijk HCV-genotype 1a en 1b replicons. Het vertoont een therapeutische index (CC50/EC50) van ten minste 105 en is inactief tegenover een panel van 10 RNA- en DNA-virussen, met een EC50 hoger dan 10 μM. Dit bevestigt de specificiteit voor HCV. In Huh7-cellen die de HCV-genotype 1b replicons bevatten, blokkeert het zowel transiënte als stabiele HCV-genoomreplicatie, met EC50-waarden variërend van 1-15 pM. Bij concentraties van 100 pM of 1 nM is aangetoond dat het de subcellulaire lokalisatie en biochemische fractionering van NS5A verandert. Deze verbinding remt hybride replicons die HCV-genotype-4 NS5A-genen bevatten met een EC50 van 7-13 pM. Residu 30 van NS5A is een belangrijke plaats voor BMS-790052-gemedieerde resistentie in de hybride replicons.
Kenmerken Eerste-in-klasse, zeer selectieve remmer van hepatitis C-virus (HCV) NS5A met picomolaire EC50-waarden.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[4]
  • FRET-assay voor HCV NS5A-remmers

    Dit peptide (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2) bevat een fluorescerende donor {EDANS, 5-[(2-aminoethyl)amino]naftaleen-1-sulfonzuur} nabij het ene uiteinde en een acceptor {DABCYL, 4-[(4-dimethylamino)fenyl]azo}benzoëzuur} nabij het andere uiteinde. Intermoleculaire resonantie-energieoverdracht tussen de donor en acceptor dooft de fluorescentie van het peptide, maar wanneer het NS3 Protease het peptide klieft, komen de producten vrij uit de resonantie-energieoverdracht-doving. De fluorescentie van de donor neemt in de loop van de tijd toe naarmate meer substraat wordt gekliefd door NS3 Protease. De detectiereagentia zijn: 5× luciferase celkweeklysisreagens verdund met dH2O tot 1×, met toevoeging van NaCl (150 mM) en FRET-peptide (20 μM). HCV-Huh-7 cellen werden in 96-wells platen geplaatst en gedurende de nacht laten hechten (1×104 cellen per well). De volgende dag werd Daclatasvir (BMS-790052) aan de wells toegevoegd en werden de platen 72 uur geïncubeerd. De platen werden vervolgens gespoeld met PBS en de FRET-assay werd uitgevoerd door 30 μL van het bovengenoemde FRET-peptidedetectiereagens aan elke well toe te voegen. Signalen werden verkregen met behulp van een Cytofluor 4000-instrument, ingesteld op 340 nm (excitatie)/490 nm (emissie) automodus, uitgevoerd gedurende 20 cycli of minder, en de platen werden afgelezen in kinetische modus. Na de FRET-assay werd 40 μL luciferasesubstraat aan elke well toegevoegd en werd de luciferaseactiviteit gemeten.
Celassay:[1]
  • Cellijnen

    HCV replicon cells (Huh7)

  • Concentraties

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • Incubatietijd

    72 hours

  • Methode

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

Klantproductvalidatie

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

Gegevens van [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) Is geciteerd door 58 Publicaties

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.