BMS-777607

BMS-777607 is een selectieve ATP-competitieve Met-kinase-remmer die de autofosforylering van c-Met potent blokkeert met een IC50 van 20 nM in GTL-16 cellysaten, en selectieve remming van proliferatie aantoont in Met-gedreven tumorcellijnen, zoals de GTL-16 cellijn, H1993 en U87. [1] Deze verbinding remt hepatocytengroeifactor (HGF)-getriggerde c-Met autofosforylering met een IC50 van <1 nM in PC-3 en DU145 prostaatkankercellen. Deze verbinding heeft weinig effect op de groei van tumorcellen, maar vertoont een remmend effect op HGF-geïnduceerde celverstrooiing in PC-3 en DU145 cellen, met bijna volledige remming bij 0,5 μM. Het onderdrukt ook gestimuleerde celmigratie en invasie op een dosisafhankelijke manier (IC50 < 0,1 μM) in beide cellijnen. [2] Toepassing van deze verbinding (~10 μM) op de sterk metastatische muizen KHT-cellen gedurende 2 uur elimineert potent de basale niveaus van autofosforyleerde c-Met met een IC50 van 10 nM zonder de totale c-Met te beïnvloeden, leidend tot dosisafhankelijke remming van fosforylering van stroomafwaartse signaalmoleculen inclusief ERK, Akt, p70S6K en S6. Behandeling met deze verbinding (~1 μM) gedurende 24 uur remt potent de KHT-celverstrooiing, motiliteit en invasie bij doses in het nanomolaire bereik, wat overeenkomt met MET-gen-knockdown, en beïnvloedt de celproliferatie en kolonieformatie bescheiden. [3]

Orale toediening van BMS 777607 (6,25-50 mg/kg) vermindert significant de tumorvolumes van de GTL-16 menselijke tumorxenografts in athymische muizen zonder waargenomen toxiciteit. [1] Toediening van deze verbinding (25 mg/kg/dag) vermindert het aantal KHT longtumornoduli (28,3%), verbetert de morfologische bloeding en vermindert significant het metastatische fenotype in 6-8 weken oude vrouwelijke C3H/HeJ-muizen geïnjecteerd met knaagdierfibrosarcoom KHT-cellen zonder duidelijke systemische toxiciteit in vergelijking met de controlebehandeling. Een lage dosis van deze chemische stof (10 mg/kg) biedt ook een milde, maar niet significante remming van de vorming van longnoduli in vergelijking met de vehiculumcontrole. [3]

• Met Kinase Assay

  De kinase-reactie bestaat uit baculovirus-tot expressie gebrachte GST-Met, 3 μg poly(Glu/Tyr), 0,12 μCi ³³P γ-ATP, 1 μM ATP in 30 μL kinasebuffer (20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0,1 mg/mL BSA, 0,5 mM DTT). Reacties worden gedurende 1 uur bij 30 °C geïncubeerd en gestopt door toevoeging van koud trichloorazijnzuur (TCA) tot een eindconcentratie van 8%. TCA-precipitaten worden verzameld op GF/C unifilterplaten met behulp van een Filtermate universele oogstmachine, en de filters worden gekwantificeerd met een TopCount 96-wells vloeistofscintillatieteller. Dosis-respons-curven worden gegenereerd om de concentratie te bepalen die nodig is om 50% van de substraatfosforylering (IC50) te remmen. Deze verbinding wordt opgelost in 10 mM DMSO en geëvalueerd bij 10 concentraties, in duplo.

• Cellijnen

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• Concentraties

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• Incubatietijd

  2, 24 and 96 hours

• Methode

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• Dierlijke modellen

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• Doseringen

  10-25 mg/kg.

• Toediening

  Oral gavage once daily.