Avasimibe

Avasimibe in een concentratie van 1 μg/mL veroorzaakt een vermindering van totaal cholesterol (TC) en veresterd cholesterol (EC) door LDL-binding te remmen en het aantal scavenger-receptoren te verminderen tijdens schuimcelvorming in menselijke monocyt-afgeleide macrofagen (HMM's). Deze verbinding in een concentratie van 2 μg/mL verhoogt de cholesterol-efflux uit gevestigde HMM-schuimcellen die zijn voorgeïncubeerd met 10 μg/ml LDL. [1] Het remt de Lipoproteïne(a)-accumulatie in de kweekmedia van primaire apenhepatocyten op een dosisafhankelijke manier met 11,9% -31,3% remming; de verandering is voornamelijk geassocieerd met een verlaagde ApoA. [2] Deze chemische stof, geïncubeerd in concentraties van 10 nM, 1 μM en 10 μM gedurende 24 uur in HepG2-cellen, vermindert de ApoB-secretie in de media met respectievelijk 25%, 27% en 43%. Het vermindert de ApoB-secretie door een verbeterde intracellulaire afbraak van ApoB in plaats van een verminderde synthese van ApoB. [3] De verbinding remt ACTC met een IC50 van 3,3 μM in IC-21 macrofagen, rekening houdend met de totale remmerconcentratie in het testmonster. [4] Het remt de menselijke P450-iso-enzymen CYP2C9, CYP1A2 en CYP2C19 met een IC50 van respectievelijk 2,9 μM, 13,9 μM en 26,5 μM. [5] Deze remmer remt de ACAT-1-expressie en de cholesterolestersynthese in glioomcellijnen. Het remt de groei van glioomcellen door celcyclusarrest en apoptose te induceren als gevolg van caspase-8- en caspase-3-activering. [6]

Avasimibe vermindert significant de Lipoproteïne(a) en totale cholesterolwaarden bij negen gezonde mannelijke apen met een normaal voederdieet die gedurende 3 weken oraal werden behandeld met CI-1011 met 30 mg/kg per dag; de Lipoproteïne(a) en totale cholesterolwaarden dalen respectievelijk tot 68 en 73% van de controlewaarden. Deze verbinding verlaagt het totale cholesterol voornamelijk door een vermindering van low-density lipoproteïne (LDL). [2] Het vermindert de amyloïdeplaquelast in de cortex en hippocampus en verlaagt de niveaus van onoplosbaar Abeta40 en Abeta42 en C-terminale fragmenten van amyloïd precursorproteïne (APP) in hersenextracten van jonge humane APP-transgene muizen. Deze chemische stof vermindert diffuse amyloïde plaques door onderdrukking van astrogliose en verbeterde microgliale activering bij oude humane APP-transgene muizen. [7]

• P450 remmingsstudies

  Gepoolde menselijke levermicrosomen (HLM) van ten minste 15 donoren worden gebruikt voor alle remmingsassays. Voor IC50-bepalingen worden de substraatprobes gebruikt bij hun geschatte in vitro Km-waarden. Alle incubaties worden uitgevoerd met 100 mM kaliumfosfaatbuffer (pH 7,4) en 1 mM NADPH. Voor de CYP1A2-remmingsstudie worden incubaties uitgevoerd in een totaal volume van 0,5 ml, in duplo met 0,1 mg/ml HLM, 30 μM fenacetine, 1 mM NADPH, en in aanwezigheid van deze verbinding (0, 0,3, 0,75, 1,5, 3, 7,5, 15, 30 en 40 μM in 50 mM) in een kaliumfosfaatbuffer bij pH 7,4. Na pre-incubatie bij 37 °C gedurende 7 min wordt NADPH toegevoegd om de enzymreactie te initiëren. Het reactiemengsel wordt na 25 min afgekoeld met 500 μl ijskoude 100 ng/ml paracetamol-D₄/CH₃CN. De standaarden (4-acetamidofenol, singlet) en kwaliteitscontroles (triplo voor laag, gemiddeld en hoog) worden bij kamertemperatuur bereid. Na menging wordt 0,2 ml van de monsters overgebracht naar een andere plaat en na centrifugatie bij 3000 tpm gedurende 10 min onderworpen aan LC/MS/MS-analyse. Er wordt een Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2,1 mm (5-μm deeltjesgrootte) kolom (Supelco, Bellefonte, PA) gebruikt. De mobiele fase is isocratisch, 40:60 [acetonitril/mierenzuur, 0,1% (v/v)] bij 0,2 ml/min.

• Cellijnen

  primary human monocyte-derived macrophages

• Concentraties

  1 μg/mL or 2 μg/mL

• Incubatietijd

  48 hours

• Methode

  For foam cell formation, the growth medium (RPMI medium containing 10% human serum) is aspirated and the BMMs are rinsed four times with RPMI medium, and then HMMs are exposed to RPMI medium containing bovine serum albumin (BSA, 0.2%) and (DMSO, 0.2%, vehicle for CI-1011) (control medium) with and without agacLDL (100 μg protein/ml) and this compound (1 μg/ml) for 48 hours. For cholesterol efflux experiments, HMMs are preincubated with ag-acLDL (100 μg protein/ml) for 24h, and then exposed to control RPMI medium with and without HDL (100 μg protein/ml), this compound (2 μg/ml) or HDL plus this compound (2 μg/ml) for 24–48 hours. Additionally, the appearance of [¹⁴C]FC in the medium is monitored by first preincubating HMMs with RPMI medium containing ag-acLDL (100 μg protein/ml) radiolabeled with [4-¹⁴C]FC (0.5 μCi/ml) in an ethanolic spritz (final concentration, 0.1%) for 24 h. The medium is removed, cells rinsed three times with RPMI medium, and then cells are exposed to control RPMI medium with and without this compound (1–10 μg/ml) for 4–48 h. At each time point, the medium is aspirated and centrifuged to pellet nonadherent cells. The appearance of [¹⁴C]FC in the medium is measured by liquid scintillation spectroscopy. Cellular lipids are extracted using hexane:isopropanol (3:2, v/v) for 1 h. The distribution of cellular radiolabeled cholesterol is measured by subjecting an aliquot of the cell extract and FC and EC standards to thin layer chromatography using petroleum ether:hexane:glacial acetic acid solvent system (85:15:2, v/v). The percent FC efflux is calculated as: medium [¹⁴C]FC dpm/ cell [¹⁴C] dpm×100. FC and TC mass are quantified by gas liquid chromatography using stigmasterol (1 mg/ml) as an internal standard. EC mass is calculated as the difference between TC and FC, and all values are normalized to cell protein. The MBC is defined as the lowest concentration that exhibited 99.9% or more reduction of the numbers of colonies compared with the cfu in the initial inoculum.

• Dierlijke modellen

  male cynomolgus monkeys

• Doseringen

  30 mg/kg

• Toediening

  Orally at a single dose per day for 3 weeks