Apatinib (YN968D1) mesylate

Apatinib (YN968D1) is een nieuwe, oraal biologisch beschikbare, selectieve remmer met potentiële anti-angiogene en antineoplastische activiteiten. Apatinib bindt selectief aan en remt VEGFR2. Apatinib kan ook de activiteiten van Ret, c-kit en c-src krachtig onderdrukken met IC50-waarden van respectievelijk 0,013 μM, 0,429 μM en 0,53 μM. Apatinib remt de cellulaire fosforylering van VEGFR-2, c-kit en PDGFRβ. Apatinib remt significant de proliferatie gestimuleerd door 20 ng/mL VEGF (IC50 = 0,17μM). Apatinib remt effectief de proliferatie, migratie en buisvorming van menselijke navelstrengendotheelcellen geïnduceerd door FBS, en blokkeerde de knopvorming van de ratten-aortaboog. [1] Apatinib keert ABCB1- en ABCG2-gemedieerde MDR om door hun transportfunctie te remmen, maar niet door het AKT- of ERK1/2-pad te blokkeren of de ABCB1- of ABCG2-expressie te verlagen. Apatinib versterkt significant de cytotoxiciteit van gevestigde ABCB1- en ABCG2-substraten en verhoogde de accumulatie van DOX en Rho 123 in cellen die ABCB1 of ABCG2 overexpressen. Verder remde apatinib significant de fotoaffiniteitslabeling van zowel ABCB1 als ABCG2 met [¹²⁵I]iodoarylazidoprazosine op een concentratie-afhankelijke manier. [2]

Apatinib remt de groei van een breed scala aan humane tumorxenotransplantaten op een significante dosisafhankelijke manier. [1] Apatinib keert ABCB1-gemedieerde MDR om in het naakte muis xenotransplantaatmodel. [2] Apatinib verhoogt significant de antitumorale activiteit van doxorubicine in naakte muizen met K562/ADR xenotransplantaten. [3]

• Enzymgekoppelde immunosorbent assay

  Een poly(glu, ala, tyr) 6:3:1 willekeurig copolymeer wordt gebruikt als een tyrosine-bevattende substraatoplossing. Het substraat wordt bewaard als een 1 mg/mL stock in PBS bij –20 °C en 1 op 500 verdund met PBS om 96-wells platen (100 μL/well) te coaten. Platen worden gecoat op de dag voorafgaand aan de assay, afgesloten met zelfklevende zegels, en 's nachts bij 4 °C bewaard. Op de dag van de assay wordt de substraatoplossing weggegooid en worden de wells van de assayplaat eenmaal gewassen met PBST (PBS met 0,05% v/v Tween 20) en eenmaal met Hepes-buffer (50 mM, pH 7,4). Testverbindingen worden verdund met 10% DMSO gedemineraliseerd water en 25 μL volumes worden overgebracht naar wells in de gewassen assayplaten. Mangaanichloride-oplossing (40 mM) die 8 μM ATP bevat, wordt vervolgens (25 μL) aan alle testwells toegevoegd. Controle- en blanco wells, die verbindingverdunningsmiddel en mangaanichloride-oplossing met en zonder ATP bevatten, respectievelijk, worden ook opgenomen om het dynamische bereik van de assay te bepalen. Vers verdund enzym (50 μL) wordt aan elke well toegevoegd, en de platen worden gedurende 20 min bij kamertemperatuur geïncubeerd. De vloeistof wordt vervolgens weggegooid en de wells worden tweemaal gewassen met PBST. Muis IgG anti-fosfotyrosine-antilichaam verdund 1:6000 met PBST dat 0,5% (w/v) runderserumalbumine (BSA) bevat, wordt toegevoegd (100 μL/well), en de platen worden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat de vloeistof wordt weggegooid en de wells tweemaal worden gewassen met PBST. Meerrettikperoxidase (HRP)-gekoppeld schaap anti-muis Ig-antilichaam verdund 1:500 met PBST dat 0,5% (w/v) BSA bevat, wordt vervolgens toegevoegd (100 μL/well) en de platen worden gedurende nog eens 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat de vloeistof wordt weggegooid en de wells tweemaal worden gewassen met PBST. Een 1 mg/mL oplossing van 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonzuur wordt vers bereid in 50 mM fosfaat-citraatbuffer (pH 5,0) die 0,03% (w/v) natriumperboraat bevat, en 100 μL wordt aan elke well toegevoegd. Platen worden vervolgens gedurende 20-60 min bij kamertemperatuur geïncubeerd totdat de optische dichtheidswaarde van controlewells gemeten bij 405 nm ongeveer 1,0 is. IC50-waarden voor verbinding-enzymremming worden geïnterpoleerd met Microcal Origin na aftrek van blanco waarden.

• Cellijnen

  HUVEC

• Concentraties

  ~25 μM

• Incubatietijd

  72 h

• Methode

  The HUVEC are seeded into 96-well plates. After 24 h of incubation, cells are exposed to the test agents (vehicle as control) together with 20 ng/mL VEGF or 20% FBS for another 72 h. After fixation with 10% trichloroacetic acid, the cells are stained with 0.4% sulforhodamine B for 30 min at 37 °C and then washed with 1% acetic acid. Tris is added to dissolve the complex, and the optical density is measured at 520 n

• Dierlijke modellen

  Ls174t, HCT 116, SGC-7901, HT-29, A549, NCI-H460 xenografted BALB/cA nude mice

• Doseringen

  50, 100, 200 mg/kg

• Toediening

  p.o.