AG-490

AG-490 remt HER-2-gedreven celproliferatie met een IC50 van 3,5 μM. [1] Overeenkomend met de specifieke dosisafhankelijke remming van constitutief geactiveerde JAK2 in pre-B acute leukemie (ALL) cellen, blokkeert deze verbinding (5 μM) bijna volledig de groei van alle ALL-cellen door geprogrammeerde celdood te induceren, zonder nadelig effect op normale hematopoëse. Deze chemische stof remt de activiteiten van Lck, Lyn, Btk, Syk en Src niet. [2] Het (60-100 μM) blokkeert de constitutieve activering van Stat3sm en remt zowel de spontane als de interleukine 2-geïnduceerde groei van mycosis fungoides (MF) tumorcellen met respectievelijk IC50-waarden van 75 μM en 20 μM. [3] Deze verbinding remt krachtig IL-2-gemedieerde humane T-celgroei met een IC50 van 25 μM door de activiteiten van JAK3 en STAT5a/b te blokkeren. [4] Het remt significant de constitutieve activering van Stat3 in MOPC-, MPC11- en S194-cellen, wat leidt tot dramatische dosisafhankelijke apoptose. [6] Deze chemische stof (100 μM) remt Akt-fosforylering, remt de activering van nucleaire factor-κB en veroorzaakt de activering van GSK-3β, wat leidt tot de vermindering van c-Myc. Het (50 μM) kan apoptose induceren van BaF3-cellen die T315I- en E255K-mutanten van Bcr-Abl tot expressie brengen. [7] Deze verbinding bij 30 μM remt niet alleen Epo-geïnduceerde fosforylering van wild-type JAK2, maar ook constitutieve fosforylering van de JAK2 V617F-mutant. Het remt ook krachtig cytokine-onafhankelijke celgroei geïnduceerd door de JAK2 V617F-mutant in BaF3-cellen. [8]

Toediening van AG-490 vermindert drastisch het aantal CD45⁺ en HLA-DR⁺ cellen van 48% en 46% in het beenmerg van onbehandelde muizen, evenals 38% en 22% in de milt van onbehandelde muizen tot ondetecteerbare niveaus. [2] In vivo toediening van deze verbinding veroorzaakt apoptose van murine myeloom tumorcellen, maar remt IL-12-gemedieerde macrofaagactivering en IFN-γ-productie door lymfocyten niet. [6] In overeenstemming met de in vitro blokkering van JAK2 V617F-mutante activiteit, remt behandeling met deze chemische stof van 0,5 mg/dag gedurende 10 dagen effectief JAK2 V617F-mutant-geïnduceerde tumorigenese en tumorcelinvasie in naakte muizen. [8] Gecombineerde therapie met dit middel en IL-12 induceert grotere antitumorale effecten dan elk middel afzonderlijk in een murien myeloom tumormodel. [6]

• In vitro kinase autofosforylatie

  AG-490 wordt opgelost in DMSO 10%-H₂O-ethanol 45%. Ruwe membraanextracten (0,125 μg/mL) worden gedurende 15 minuten bij 4 °C voorgeactiveerd met EGF (20 nM) in 50 mM HEPES-buffer, pH 7,6, en 125 mM NaCl. Autofosforylatieactiviteit van EGFR- of ErbB2-kinase wordt gedurende 30 seconden bij 4 °C in V-vormige 96-wells platen getest. Membraanextracten (8 μL) worden aan elke well toegevoegd die reactiemengsel (12 μL, 50 mM HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 12 mM M₈Ac₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM NaVO₃, 1 μM ATP en 1 μCi [γ-³²P]ATP, eindconcentraties) en toenemende concentraties van deze verbinding (4 μL) bevat. Na beëindiging door toevoeging van hete monsterbuffer worden de monsters op een 6% SDS-polyacrylamidegelelektroforese-minigel geladen, de gels gedroogd en autoradieografie uitgevoerd gedurende de lineaire belichtingstijd. De receptorbanden worden densitometrisch gescand en de resultaten geanalyseerd met het Ez-Fit-programma. Voor de analyse van autofosforylatie van JAK2 wordt JAK2 geïmmunoprecipiteerd met behulp van anti-JAK2-antilichaam uit lysaten van G2-cellen die gedurende 16 uur zijn voorbehandeld met toenemende concentraties van deze chemische stof (0-50 μM). Immuuncomplexen worden vervolgens geïmmunoblot met anti-fosfotyrosine-antilichaam. Een dosisafhankelijke remming van in vitro kinase-activiteit wordt aangetoond door de autofosforylatie van JAK2 te beoordelen.

• Cellijnen

  Pre-B ALL

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 50 μM

• Incubatietijd

  16 hours

• Methode

  Cells are exposed to different concentrations of AG-490 for 16 hours. For the determination of cell proliferation, [³H]tymidine (1 μCi) is added 6 hours or more before the cultures are terminated. Cells are then collected and samples counted in a liquid scintillation counter.

• Dierlijke modellen

  SCID mice intravenously injected with ALL cells

• Doseringen

  0.85 mg + 0.5 mg daily

• Toediening

  Continuous pump infusion supplemented with daily intraperitoneal injections