3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride

3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) resulteert in een significante toename van de accumulatie van cellen in de G0/G1-fase (58,5%) met een gelijktijdige afname van het aantal cellen in de S-fase (35,2%) en G2/M-fasen (6,3%) van de celcyclus van menselijke acute myeloïde leukemie OCI-AML3-cellen. 3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) induceert apoptose in OCI-AML3 (~50%) en HL-60-cellen (~50%), en een reductie van meer dan 90% in kolonie groei na 48 uur. 3-Deazaneplanocin A verlaagt EZH2-niveaus en remt trimethylatie van lysine 27 op histon H3 in de HL-60- en OCI-AML3-cellen en in primaire AML-cellen. Behandeling met 3-Deazaneplanocin A induceert p16, p21, p27 en FBXO32 terwijl het cycline E- en HOXA9-niveaus verlaagt. 500 nM 3-Deazaneplanocin A induceert differentiatie van HL-60 naar CD11b⁺-cellen met bijna 3-voudig na 48 uur. [2] 3-Deazaneplanocin A heeft uitstekende activiteit tegen verschillende virale typen. 3-Deazaneplanocin A is actief tegen vesiculaire stomatitis in L929-cellen, parainfluenza 3 in H.Ep-2, vaccinia- en gelekoortsvirussen in vero-cellen met IC50 van respectievelijk 0,2, 3,6, 2,1 en 2,9 μg/mL. [3] 3-Deazaneplanocin A vertoont een sterk en uniform leishmanistatisch effect op Amerikaanse Leishmania (L mexicana en L brasiliensis)-stammen in de studie met een gemiddelde ID50 van 96 ng/mL, maar toont geen remming tegen de verschillende T. cruzi- en T. rangeli-stammen getest met concentraties tot 10 μg/mL. Bij een dosis van 200 ng/mL remt 3-Deazaneplanocin A de incorporatie van S-adenosyl-L-3H-methylmethionine en 3-thymidine door promastigoten na vier dagen. Bij een dosis van 100 ng/mL elimineert 3-Deazaneplanocin A ongeveer 56% van de L mexicana en L brasiliensis uit geïnfecteerde menselijke macrofagen. [4]

3-Deazaneplanocin A vertoont antileukemische activiteit in vivo. 3-Deazaneplanocin A in doses van 8 mg/kg vertoont in vivo antivirale activiteit tegen het vacciniavirus in een muizenstaartpokkenassay met een mediaan van 0,0 pokken per staart (84% bescherming). [3] 3-Deazaneplanocin A in doses variërend van 0,5 tot 1,5 mg/kg/dag, verminderde significant de ontwikkeling van cutane leishmaniale infectie geproduceerd in inteelt BALB/c-muizen door inoculatie met L. b. guyanensis. [4] 3-Deazaneplanocin A induceert een massaal verhoogde interferon-α-productie in met het ebolavirus geïnfecteerde muizen. 3-Deazaneplanocin A (s.c. injectie van 2 mg/kg na infectie) voorkomt sterfte bij muizen geïnfecteerd met 1000 pfu (30 000 LD50) van muis-aangepast EBO-Z. Behandeling met 3-Deazaneplanocin A op dag 1 vermindert de gemiddelde serumvirustiters op dag 2 met 100-voudig en op dag 3 met 100 000-voudig, vergeleken met placebocontroles, en resulteert in een gemiddeld serum IFN-α-niveau van 1420 pg/mL op dag 2 en 1830 pg/mL op dag 3. [5]

• S-adenosylhomocysteïne hydrolase activiteitsbepaling

  Het reactiemengsel gebruikt voor de bepaling van AdoHcyase bevat, in een eindvolume van 0,5 mL, 50 mM kaliumfosfaat (pH 7,6), 5 mM dithiothreitol, 1 mM EDTA, 10% glycerol en het enzym. L-[8- ^14C]AdoHcy wordt gebruikt als substraat en 5 eenheden kalfdarm adenosine deaminase zijn inbegrepen. De reactie wordt gestopt door toevoeging van 100 μL 5 M mierenzuur, waarna het reactiemengsel op een kolom (0,8×2,5 cm) van SP-Sephadex C-25 wordt gegoten, eerder geëquilibreerd in 0,1 M mierenzuur. Elke reageerbuis wordt gespoeld met 0,5 mL 0,1 M mierenzuur. Het gevormde [¹⁴C]Inosine wordt geëlueerd van de kolom met 3,5 mL 0,1 M mierenzuur in een scintillatieflacon. De radioactiviteit wordt bepaald na toevoeging van 10 mL scintillatievloeistof. De gebruikte hoeveelheid enzym is ongeveer 105 pU, of 75 ng van het gezuiverde enzym. Eén eenheid is de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 pmol product te vormen in 1 min bij 37 ℃.

• Cellijnen

  Human acute myeloid leukemia HL-60

• Concentraties

  ~1 μM

• Incubatietijd

  2 days

• Methode

  Cells are treated with the indicated concentrations of 3-Deazaneplanocin A for 48 hours. After the designated treatments, cells are harvested and washed twice with PBS, and approximately 500 cells are plated in complete Methocult and cultured for 7 to 10 days at 37 ℃ in a 5% CO₂ environment. Cells are dyed with crystal violet, and relative colony density is determined by solubilizing the crystal violet dye in 10% acetic acid followed by measurement of absorbance at 450 nm.

• Dierlijke modellen

  Human acute myeloid leukemia xenografts HL-60

• Doseringen

  1 mg/kg

• Toediening

  initiated on day 7 and administered twice per week (Tuesday-Thursday) intraperitoneally for 2 weeks