Home TGF-beta/Smad TGF-beta/Smad Remmer RepSox (E-616452)

alleen voor onderzoeksdoeleinden

RepSox (E-616452) TGF-beta/Smad Remmer

Cat.nr.S7223

RepSox (E-616452, SJN 2511, ALK5 Inhibitor II) is een krachtige en selectieve remmer van TGFβR-1/ALK5 met een IC50 van respectievelijk 23 nM en 4 nM voor ATP-binding aan ALK5 en ALK5-autofosforylering in celvrije assays.
RepSox (E-616452) TGF-beta/Smad Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 287.32

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.92%
99.92

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
baculovirus/Sf9 cells Function assay Inhibition of recombinant Activin A receptor type II-like kinase (ALK5) expressed in baculovirus/Sf9 cells, IC50=4 nM 15317461
HepG2 cells Function assay Stimulation of Transforming growth factor beta receptor I kinase in HepG2 cells, IC50=10 nM 15317461
Sf9 Function assay Inhibition of human ALK5 expressed in Sf9 insect cells using casein as substrate in presence of [gamma-33P]ATP, IC50 = 0.181 μM. 28135685
Sf9 Function assay Inhibition of mouse ABL expressed in Sf9 insect cells using GGEAIYAAPFKK as substrate in presence of [gamma-33P]ATP, IC50 = 21 μM. 28135685
HeLa Function assay 1 uM 30 mins Inhibition of ALK5 in serum starved human HeLa cells assessed as reduction in TGF-beta-induced SMAD2/3 nuclear transaction at 1 uM pre-incubated for 30 mins before TGF-beta stimulation for 30 mins by immunofluorescence analysis 28135685
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 287.32 Formule

C17H13N5

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 446859-33-2 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen SJN 2511,ALK5 Inhibitor II Smiles CC1=NC(=CC=C1)C2=C(C=NN2)C3=NC4=C(C=C3)N=CC=C4

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 57 mg/mL (198.38 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TGFβR1(ALK5)
(Cell-free assay)
4 nM
In vitro

RepSox (E-616452) remt ATP-binding aan ALK5 en ALK5-autofosforylering met respectievelijk een IC50 van 23 nM en 4 nM. Het remt ook TGF-β geïnduceerde cellulaire PAI-1 luciferasactiviteit met een IC50 van 18 nM.

Deze verbinding is in staat om Sox2 succesvol te vervangen bij herprogrammering door transformatiegroeifactor-β (Tgf-β) signalering te remmen, wat op zijn beurt Nanog-expressie induceert. Het effect van RepSox dat herprogrammering induceert, vereist geen chromatine-remodellering. Het blijkt efficiënt te zijn bij het genereren van iPSC's.

Kinase Assay
ALK5 fluorescentiepolarisatie bindingsassay
De binding van de verbinding aan ALK5 wordt getest op gezuiverd recombinant GST-ALK5 (residuen 198-503). De verplaatsing van rhodamine groen fluorescent gelabelde ATP-competitieve remmer door verschillende concentraties testverbindingen wordt gebruikt om een bindings-pIC50 te berekenen. GST-ALK5 wordt toegevoegd aan een buffer die 62,5 mM Hepes, pH 7,5, 1 mM DTT, 12,5 mM MgCl2, 1,25 mM CHAPS en 1 nM rhodamine groen-gelabeld ligand bevat, zodat de uiteindelijke ALK5-concentratie 10 nM is, gebaseerd op actieve-site-titratie van het enzym. Veertig microliter van het enzym/ligand-reagens wordt toegevoegd aan 384-wells analyseplaten die 1 μL van verschillende concentraties RepSox (E-616452) bevatten. De platen worden onmiddellijk afgelezen op een fluorescentielezer met excitatie-, emissie- en dichroïsche filters van respectievelijk 485, 530 en 505 nm. De fluorescentiepolarisatie voor elke put wordt berekend door de Acquest en wordt vervolgens geïmporteerd in curve-fitting software voor de constructie van concentratie-responscurves.
In vivo

Wanneer geïnjecteerd in blastocysten, is RepSox (E-616452) in staat om bij te dragen aan de vorming van chimerische embryo's in vivo. Een eendaagse behandeling met deze verbinding is voldoende om transgene Sox2 te vervangen.

Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32066676/

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot α-SMA / Calponin / Histone H3
S7223-WB1
30365043
Immunofluorescence Smad2/3 / cytokeratin
S7223-IF1
28729719