Home Cell Cycle Aurora Kinase Remmer GSK1070916

alleen voor onderzoeksdoeleinden

GSK1070916 Aurora Kinase Remmer

Cat.nr.: S2740

GSK1070916 is een omkeerbare en ATP-competitieve remmer van Aurora B/C met IC50 van 3,5 nM/6,5 nM. Het vertoont een >100-voudige selectiviteit tegen het nauw verwante Aurora A-TPX2-complex. Fase 1.
GSK1070916 Aurora Kinase Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 507.63

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.79%
99.79

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
A549 cells Proliferation assay 6-7 d Antiproliferative activity against human A549 cells after 6 to 7 days by celltiter-glo luminescence assay in absence of 70% human serum albumin, EC50=0.007 μM
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 507.63 Formule

C30H33N7O

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 942918-07-2 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCN1C=C(C(=N1)C2=CC=C(C=C2)NC(=O)N(C)C)C3=C4C=C(NC4=NC=C3)C5=CC=CC(=C5)CN(C)C

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 102 mg/mL (200.93 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 102 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Aurora B-INCENP
(Cell-free assay)
3.5 nM
Aurora C-INCENP
(Cell-free assay)
6.5 nM
FLT1
(Cell-free assay)
42 nM
Tie-2
(Cell-free assay)
59 nM
SIK
(Cell-free assay)
70 nM
FLT4
(Cell-free assay)
74 nM
FGFR1
(Cell-free assay)
76 nM
In vitro
GSK1070916 selectively inhibits Aurora B and Aurora C with Ki of 0.38 nM and 1.5 nM over Aurora A with Ki of 490 nM. Inhibition of Aurora B and Aurora C by this compound is time-dependent, with an enzyme-inhibitor dissociation half-life of >480 min and 270 min respectively. In addition, it is also a competitive inhibitor with respect to ATP. Human tumor cells treated with this inhibitor shows dose-dependent inhibition of phosphorylation on serine 10 of Histone H3, a substrate specific for Aurora B. Moreover, it inhibits the proliferation of tumor cells with EC50 values of <10 nM in over 100 cell lines spanning a broad range of tumor types, with a median EC50 of 8 nM. Although this compound has potent activity against proliferating cells, a dramatic shift in potency is observed in primary, nondividing, normal human vein endothelial cells. Furthermore, cells treated with this agent do not arrest in mitosis but instead fails to divide and become polyploid, ultimately leading to apoptosis. In another study, it is also reported high chromosome number associated with resistance to the inhibition of Aurora B and C suggests cells with a mechanism to bypass the high ploidy checkpoint are resistant to this chemical.
Kinase Assay
Kinase Assay
Het vermogen van GSK1070916 om de Aurora-enzymen te remmen, wordt gemeten met behulp van in vivo kinase assays. De assays meten het vermogen van Aurora A, Aurora B en Aurora C om een synthetisch peptidesubstraat te fosforyleren. Biotin-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2 wordt gebruikt voor de Aurora A–TPX2 LEADseekerTM assay en 5FAM-PKAtide wordt gebruikt voor de IMAPTM assay voor alle drie Aurora kinases. Om rekening te houden met tijdsafhankelijke remming van Aurora-enzymen, worden Aurora A–TPX2, Aurora B–INCENP en Aurora C–INCENP geïncubeerd met deze verbinding in verschillende concentraties gedurende 30 min voordat de reacties worden geïnitieerd met de toevoeging van substraten. Voor de Aurora A LEADseekerTM assay zijn de uiteindelijke assaycondities 0,5 nM Aurora A–TPX2, 1 μM peptidesubstraat, 6 mM MgCl2, 1,5 μM ATP, 0,003 μCi/μL [γ-33P] ATP in 50 mM Hepes, pH 7,2, 0,15 mg/mL BSA, 0,01% Tween-20, 5 mM DTT en 25 mM KCl. De reacties worden geïncubeerd bij kamertemperatuur (25 °C) gedurende 120 min en beëindigd door de toevoeging van LEADseekerTM-parels in PBS met EDTA (uiteindelijke concentratie 2 mg/mL parels en 25 mM EDTA). De platen worden vervolgens verzegeld en de parels mogen 's nachts bezinken. Productvorming wordt gekwantificeerd met behulp van een Viewlux Imager. Voor de IMAPTM assays worden Aurora A–TPX2 (uiteindelijke concentratie 1 nM), Aurora B–INCENP (uiteindelijke concentratie 2 nM) of Aurora C–INCENP (uiteindelijke concentratie 2,5 nM) toegevoegd aan de verbinding-bevattende platen in 5 μL buffer (25 mM Hepes, pH 7,2, voor Aurora A, 25 mM Hepes, pH 7,5, voor Aurora B en 20 mM Hepes, pH 7,2, voor Aurora C) met 0,15 mg/mL BSA, 0,01% Tween 20 en 25 mM NaCl. Dit mengsel wordt bij kamertemperatuur geïncubeerd gedurende 30 min. Om de reactie te starten, wordt 5 μL van een substraatoplossing toegevoegd die dezelfde Hepes-buffer bevat als gebruikt voor de pre-incubatie, 25 mM NaCl, MgCl2 (respectievelijk 2, 4 en 4 mM voor Aurora A, B en C), DTT (respectievelijk 4, 4 en 2 mM voor Aurora A, B en C), ATP (respectievelijk 4, 4 en 10 μM voor Aurora A, B en C), 200 nM 5FAM-PKAtide, 0,01% Tween 20 en 0,15 mg/mL BSA. De reacties worden bij kamertemperatuur geïncubeerd gedurende 120 min voor Aurora A en B en 60 min voor Aurora C. Deze reacties worden vervolgens beëindigd door de toevoeging van 10 μL van 1:500 (1:600 voor Aurora C) Progressive Binding Reagent in 95% Progressive Binding Buffer A en 5% Progressive Binding Buffer B. Platen worden bij kamertemperatuur geïncubeerd gedurende ca. 90-120 min (tijd die nodig is om evenwicht te bereiken). Platen worden afgelezen in een Molecular Devices Analyst platenlezer in fluorescentiepolarisatiemodus.
In vivo
GSK1070916 (25, 50, or 100 mg/kg) shows dose-dependent inhibition of phosphorylation of an Aurora B–specific substrate in mice and consistent with its broad cellular activity, this compound has antitumor effects in 10 human tumor xenograft models including breast, colon, lung, and two leukemia models.
Referenties