Home Protein Tyrosine Kinase EGFR inhibitor Pelitinib (EKB-569)

alleen voor onderzoeksdoeleinden

Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor

Cat.nr.: S1392

Pelitinib (EKB-569) is a potent irreversible EGFR inhibitor with IC50 of 38.5 nM. This compound also slightly inhibits Src, MEK/ERK and ErbB2 with IC50s of 282 nM, 800 nM and 1255 nM, respectively. Phase2.
Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 467.92

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.49%
99.49

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
A431 Function assay Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM. 20797871
Sf9 Function assay 10 mins Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM. 30600149
A431 Function assay 90 mins Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM. 30973735
DiFi Function assay 2 hrs Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM. 17689836
UCH1 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM. 30973735
UCH2 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM. 30973735
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 467.92 Formule

C24H23ClFN5O2

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 257933-82-7 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Kenmerken
An improved version of EKI-785.
Targets/IC50/Ki
EGFR
38.5 nM
Src
282 nM
MEK/ERK
800 nM
ErbB2
1.255 μM
Raf
3.353 μM
In vitro
Pelitinib (EKB-569) displays much higher inhibitory activity against EGFR, compared with the closely related c-erbB-2, as well as other kinases such as Src, Cdk4, c-Met, Raf, and MEK/ERK, with IC50 ranging from 282 nM for Src to >20 μM for Cdk4. Consistently, this compound treatment significantly inhibits the autophosphorylation of EGFR but not c-Met in A431 cells. It potently inhibits the proliferation of normal human keratinocytes (NHEK), as well as A431 and MDA-468 tumor cells with IC50 of 61 nM, 125 nM, and 260 nM, respectively, while displaying little activity against MCF-7 cells with IC50 of 3.6 μM. This chemical inhibits EGF-induced phosphorylation of EGFR in A431 and NHEK cells with IC50 of 20-80 nM, as well as the phosphorylation of STAT3 with IC50 of 30-70 nM. It at 75-500 nM also specifically inhibits the activation of AKT and ERK1/2, without affecting NF-κB pathway. In NHEK cells, this compound also potently inhibits TGF-α mediated EGFR activation with IC50 of 56 nM, as well as activation of STAT3 and ERK1/2 with IC50 of 60 nM and 62 nM, respectively.
Kinase Assay
Autofosforylering van EGFR in cellen
Voor experimenten met cellen in kweek worden A431-cellen gedurende 2,75 uur behandeld met verschillende concentraties Pelitinib (EKB-569) voordat ze gedurende 0,25 uur samen met 100 ng/mL EGF worden geïncubeerd. Cellen worden tweemaal gewassen met koude fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) voordat ze worden toegevoegd aan lysisbuffer (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% natriumdeoxycholaat, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatine A, 10 mg/mL leupeptine, 20 KIU/mL aprotinine, 2 mM natriumorthovanadaat en 100 mM natriumfluoride) gedurende 20 minuten op ijs, vóór immunoprecipitatie en SDS-PAGE-immunoblotting. Voor immunoprecipitatie worden gekweekte cellen in koude lysisbuffer geplaatst en onmiddellijk op ijs gehomogeniseerd met een polytron met verschillende pulsen. Het homogenaat wordt eerst gecentrifugeerd bij 2500 rpm (20 minuten, 4 °C) en daarna opnieuw bij 14.000 rpm in een microcentrifuge (10 minuten, 4 °C). Supernatanten (1000 μg eiwit) worden gedurende 2 uur bij 4 °C geïncubeerd met 15 mL EGFR polyklonaal antilichaam. Na 2 uur wordt 50 μL proteïne G plus/proteïne A agarose kralen toegevoegd en gedurende 2 uur bij 4 °C geïncubeerd met constante rotatie. Na wassen met lysisbuffer worden de kralen gedurende 2 minuten gekookt in Laemmli-monsterbuffer. Eiwitten worden vervolgens gescheiden door SDS-PAGE, overgebracht op een immobilonmembraan en 's nachts geprobeerd met een anti-fosfotyrosine antilichaam geconjugeerd met mierikswortelperoxidase (HRP). Membranen worden ontwikkeld met behulp van het ECL-reagens. Totaal EGFR-eiwit wordt bepaald door membranen te strippen en opnieuw te proben met receptorgeoriënteerde antilichamen. Kwantificering van banden gebeurt door densitometrie, met behulp van ImageQuant-software met een Molecular Dynamics laser transmissie scanner.
In vivo
A single oral dose of 10 mg/kg Pelitinib (EKB-569) potently inhibits the EGFR phosphorylation in A431 xenografts with over-expressed EGFR, by 90% within 1 hour, and by >50% after 24 hours. Administration of this compound at 20 mg/kg/day inhibits tumorigenesis in APCMin/+ mice by 87%, equivalent to the effect of used with 2 times doses of EKI-785 (40 mg/kg/day), consistent with greater in vivo potency. This chemical selectively inhibits EGFR signaling in airway epithelial cells in vivo. In the mouse model of airway epithelial remodeling that is inducible by viral infection and features a delayed but permanent switch to goblet cell metaplasia, this compound treatment at 20 mg/kg/day corrects all 3 aspects of epithelial remodeling, by completely blocking the increase of ciliated cells and decrease of Clara cells, and significantly inhibiting the metaplasia of goblet cells.
Referenties