Home Cell Cycle Aurora Kinase Remmer Hesperadin

alleen voor onderzoeksdoeleinden

Hesperadin Aurora B remmer

Cat.nr.: S1529

Hesperadin remt Aurora B potent met een IC50 van 250 nM in een celvrije assay. Het vermindert de activiteit van AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK aanzienlijk, terwijl het de MKK1-activiteit in vivo niet remt.
Hesperadin Aurora Kinase Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 516.65

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.09%
99.09

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 516.65 Formule

C29H32N4O3S

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 422513-13-1 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin inhibits the ability of immunoprecipitated Aurora B to phosphorylate histone H3 with IC50 of 250 nM and markedly reduces the activity of other kinases (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1, and PHK) at a concentration of 1 μM. In contrast, only 20-100 nM of this compound is sufficient to induce the loss of mitotic histone H3-Ser10 phosphorylation in HeLa cells. Its treatment causes defects in mitosis and cytokinesis, leading to stoppage of proliferation of HeLa cells and polyploidization, which can be specifically ascribed to the inhibition of Aurora B function during the process of chromosome attachment. This compound (100 nM) quickly overrides the mitotic arrest induced by taxol or monastrol but not by nocodazole. It and nocodazole treatment in HeLa cells abolishes kinetochore localization of BubR1 and diminishes the intensity of Bub1 at kinetochores, suggesting that Aurora B function is required for efficient kinetochore recruitment of BubR1 and Bub1, which in turn might be necessary for prolonged checkpoint signaling. It prevents the phosphorylation of recombinant trypanosome histone H3 by the T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) from pathogenic Trypanosoma brucei with IC50 of 40 nM in vitro kinase assays. This chemical significantly inhibits cell growth of cultured infectious bloodstream forms (BF) with IC50 of 48 nM, and only weakly inhibits cell growth of insect stage procyclic forms (PF) with IC50 of 550 nM.
Kinase Assay
De Aurora B kinase test
Voor de Aurora B kinase test worden HeLa-cellen gelyseerd in een buffer met 50 mM NaCl. Het hele celextract wordt gedraaid bij 13.000 tpm gedurende 20 minuten bij 4 °C met behulp van een tafelcentrifuge. Het pellet verkregen uit 200 mg van het hele celextract wordt opnieuw geëxtraheerd in 15 ml lysisbuffer met 250 mM NaCl om actieve Aurora B kinase uit mitotisch chromatine te verkrijgen. Het supernatant met lage snelheid van het laatste extract wordt gebruikt voor immunoprecipitatie. Monoklonale muizenantistoffen anti-AIM-1, of muizenantistoffen anti-HA, worden gekoppeld aan GammaBind Plus Sepharose, en de beads worden gedurende 90 minuten bij 4 °C overeind in het extract gedraaid. De beads worden gewassen, gealiquoteerd en gewassen in kinasebuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF). De kinase test wordt uitgevoerd met 10 μL beads in 20 μL kinasebuffer met 5 μg histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-32P]ATP en verschillende concentraties van deze verbinding gedurende 20 minuten bij 37 °C. SDS-monsterbuffer wordt toegevoegd, en de monsters worden gekookt en gescheiden door SDS-PAGE. De gel wordt gedroogd en het radioactieve signaal wordt gedetecteerd door PhosphorImager-analyse. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van ImageQuant-software.
Referenties

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832