Home Cell Cycle Aurora Kinase Remmer Hesperadin

alleen voor onderzoeksdoeleinden

Hesperadin Aurora B remmer

Cat.nr.S1529

Hesperadin remt Aurora B potent met een IC50 van 250 nM in een celvrije assay. Het vermindert de activiteit van AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK aanzienlijk, terwijl het de MKK1-activiteit in vivo niet remt.
Hesperadin Aurora Kinase Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 516.65

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.09%
99.09

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 516.65 Formule

C29H32N4O3S

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 422513-13-1 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin remt het vermogen van geïmmunoprecipiteerde Aurora B om histon H3 te fosforyleren met een IC50 van 250 nM en vermindert de activiteit van andere kinasen (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK) aanzienlijk bij een concentratie van 1 μM. Daarentegen is slechts 20-100 nM van deze verbinding voldoende om het verlies van mitotische histon H3-Ser10-fosforylering in HeLa-cellen te induceren. De behandeling ervan veroorzaakt defecten in mitose en cytokinese, wat leidt tot het stoppen van de proliferatie van HeLa-cellen en polyploïdisatie, wat specifiek kan worden toegeschreven aan de remming van de Aurora B-functie tijdens het proces van chromosoombevestiging. Deze verbinding (100 nM) heft snel de mitotische arrestatie op die wordt geïnduceerd door taxol of monastrol, maar niet door nocodazol. De behandeling met deze verbinding en nocodazol in HeLa-cellen heft de kinetochoorlokalisatie van BubR1 op en vermindert de intensiteit van Bub1 bij kinetochoren, wat suggereert dat de Aurora B-functie vereist is voor efficiënte kinetochoorrekrutering van BubR1 en Bub1, wat op zijn beurt nodig zou kunnen zijn voor langdurige checkpoint-signalering. Het voorkomt de fosforylering van recombinant trypanosoomhiston H3 door de T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) van pathogene Trypanosoma brucei met een IC50 van 40 nM in in vitro kinaseassays. Dit chemische middel remt de celgroei van gekweekte infectieuze bloedbaanvormen (BF) significant met een IC50 van 48 nM, en remt de celgroei van insectenstadium procyclische vormen (PF) slechts zwak met een IC50 van 550 nM.
Kinase Assay
De Aurora B kinase test
Voor de Aurora B kinase test worden HeLa-cellen gelyseerd in een buffer met 50 mM NaCl. Het hele celextract wordt gedraaid bij 13.000 tpm gedurende 20 minuten bij 4 °C met behulp van een tafelcentrifuge. Het pellet verkregen uit 200 mg van het hele celextract wordt opnieuw geëxtraheerd in 15 ml lysisbuffer met 250 mM NaCl om actieve Aurora B kinase uit mitotisch chromatine te verkrijgen. Het supernatant met lage snelheid van het laatste extract wordt gebruikt voor immunoprecipitatie. Monoklonale muizenantistoffen anti-AIM-1, of muizenantistoffen anti-HA, worden gekoppeld aan GammaBind Plus Sepharose, en de beads worden gedurende 90 minuten bij 4 °C overeind in het extract gedraaid. De beads worden gewassen, gealiquoteerd en gewassen in kinasebuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF). De kinase test wordt uitgevoerd met 10 μL beads in 20 μL kinasebuffer met 5 μg histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-32P]ATP en verschillende concentraties van deze verbinding gedurende 20 minuten bij 37 °C. SDS-monsterbuffer wordt toegevoegd, en de monsters worden gekookt en gescheiden door SDS-PAGE. De gel wordt gedroogd en het radioactieve signaal wordt gedetecteerd door PhosphorImager-analyse. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van ImageQuant-software.
Referenties

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832