Home DNA Damage/DNA Repair PARP inhibitor AG-14361

alleen voor onderzoeksdoeleinden

AG-14361 PARP inhibitor

Cat.nr.: S2178

AG14361 is a potent inhibitor of PARP1 with Ki of <5 nM in a cell-free assay. It is at least 1000-fold more potent than the benzamides.
AG-14361 PARP inhibitor Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 320.39

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.89%
99.89

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
LoVo cells Function assay Concentration that gives 50% growth inhibition in LoVo cells, activity expressed as GI50, GI50=11.2 μM
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 320.39 Formule

C19H20N4O

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 328543-09-5 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CN(C)CC1=CC=C(C=C1)C2=NC3=CC=CC4=C3N2CCNC4=O

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 51 mg/mL (159.18 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 21 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Kenmerken
The 1st high-potency PARP-1 inhibitor with the specificity & in vivo activity to enhance chemotherapy and radiation therapy of human cancers.
Targets/IC50/Ki
PARP1
(Cell-free assay)
<5 nM(Ki)
In vitro

AG14361 is minstens 1000-maal potenter dan de benzamiden. De IC50 voor AG14361 is 29 nM in gepermeabiliseerde SW620-cellen en 14 nM in intacte SW620-cellen. Kristallografische analyse van AG14361 gebonden aan het katalytische domein van kippen-PARP-1 toont aan dat het tricyclische ringsysteem van AG14361 zich bevindt in een pocket bestaande uit de aminozuurresiduen Trp861, His862, Gly863, Tyr896, Phe897, Ala898, Lys903, Ser904, Tyr907 en Glu988. AG14361 vormt belangrijke waterstofbruggen met Ser904 en Gly863 en een water-gemedieerde waterstofbrug met Glu988. De door AG14361 geïnduceerde groeiremming wordt niet toegeschreven aan PARP-1-gerelateerde effecten, omdat maximale PARP-1-remming wordt waargenomen bij veel lagere concentraties (≤1 μM) dan de GI50. AG14361 bij 0,4 μM beïnvloedt de genexpressie of groei van kankercellen niet, maar het verhoogt de antiproliferatieve activiteit en remt het herstel van potentieel dodelijke γ-stralingsschade in LoVo-cellen met 73%. Bovendien verandert 0,4 μM AG14361 de genexpressie niet substantieel, zoals aangetoond door microarray-analyse. Een blootstelling van 17 uur van A549-cellen aan 0,4 μM AG14361 verandert de expressie van de 6800 genen niet. Hoewel 0,4 μM AG14361 de cellulaire PARP-1-activiteit met meer dan 85% remt, verandert het in essentie de genexpressie en celproliferatie niet, wat aangeeft dat de cellulaire effecten van deze lage concentratie van AG14361 specifiek zijn voor PARP-1-remming. Hogere, groeiremmende concentraties van AG14361 beïnvloeden de genexpressie, maar deze effecten zijn waarschijnlijk niet gerelateerd aan PARP-1-remming, omdat celproliferatie in PARP-/- en PARP-1+/+-cellen gelijk wordt beïnvloed. AG14361 wordt snel opgenomen in de bloedbaan en verdeeld naar de tumor en lever, met lagere concentraties gedetecteerd in de hersenen. De weefsel-tot-plasma concentratieverhouding geeft aan dat AG14361 in tumorweefsel wordt vastgehouden over tijd in beide xenograftmodellen, met tumorconcentraties (≥15 μM gedurende 2 uur) die de vereiste voor het remmen van PARP-1-activiteit in vitro overschrijden. AG14361 verbetert de activiteit in alle MMR-competente cellen (1,5–3,3-voudig) maar is effectiever in MMR-deficiënte cellen (3,7–5,2-voudige potentiëring), waardoor resistentie wordt overwonnen. Daarentegen verhoogt benzylguanine de werkzaamheid alleen in MMR-competente cellen, maar is het ineffectief in MMR-deficiënte cellen. AG14361 verbetert de groeiremmende en cytotoxische effecten van topoisomerase I-giften. AG14361 verhoogt de persistentie van camptothecine-geïnduceerde DNA-enkelstrengsbreuken.

Kinase Assay
PARP-1 Activiteitsassays
De activiteit van full-length recombinant humaan PARP-1 wordt gemeten in een reactiemengsel dat 20 nM PARP-1, 500 μM NAD+ plus [32P]NAD+ (0,1–0,3 μCi per reactiemengsel), en geactiveerd kalfs-thymus-DNA (10 μg/mL) bij 25oC bevat; de reactie wordt na 4 minuten beëindigd door toevoeging van ijskoude 10% (gew./vol.) trichloorazijnzuur. Het reactieproduct [32P]ADP-ribose, opgenomen in zuur-onoplosbaar materiaal, wordt afgezet op Whatman GF/C glasvezelfilters met een Bio-Dot microfiltratieapparaat en gekwantificeerd met een PhosphorImager. Remming van PARP-1-activiteit door AG14361 bij 0–600 nM wordt gemeten, en de Ki voor AG14361 wordt berekend door niet-lineaire regressieanalyse.
In vivo

Behandeling met AG14361 vóór bestraling verhoogt statistisch significant de gevoeligheid voor radiotherapie van muizen met LoVo-xenografts. AG14361 verhoogt statistisch significant de bloedstroom in xenografts en verhoogt zo potentieel de medicijnafgifte aan tumorxenografts. In vivo verhogen niet-toxische doses AG14361 de vertraging van LoVo-xenograftgroei, geïnduceerd door röntgenstraling, met 2- tot 3-voudig. Gelijktijdige toediening van AG14361 verhoogt statistisch significant de activiteit tegen LoVo-xenografts, waarbij de tumorgroeivertraging wordt verhoogd van 3 dagen naar 9 dagen door AG14361 bij 5 mg/kg en naar 10 dagen door AG14361 bij 15 mg/kg. De combinatie van AG14361 veroorzaakt volledige regressie van SW620-xenografttumoren. PARP-1-activiteit, gedetecteerd door farmacodynamische analyse, in SW620-xenografts wordt met meer dan 75% geremd gedurende ten minste 4 uur na intraperitoneale toediening van AG14361 (10 mg/kg), consistent met de concentratie van AG14361 die in de tumor blijft bestaan.

Referenties