PNU-120596

Catalogusnr.S2629 Batch:S262902

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C13H14ClN3O4
Molecuulgewicht 311.72 CAS-nr. 501925-31-1
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 62 mg/mL (198.89 mM)
Ethanol 1 mg/mL (3.2 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving PNU-120596 (Nsc 216666) is een positieve allosterische modulator van α7 nAChR met een EC50 van 216 nM.
Doelen
α7 nAChR
216 nM(EC50)
In vitro PNU-120596 verhoogt de door agonist (Ach) opgewekte calciumflux die wordt gemedieerd door een gemanipuleerde variant van de menselijke α7 nAChR. Deze verbinding verhoogt de door agonisten (choline en ACh) opgewekte stromen die worden gemedieerd door wildtype receptoren en toont ook een uitgesproken verlenging van de opgewekte respons in aanwezigheid van de agonist in Xenopus-oöcyten. Het verhoogt de gemiddelde open tijd van het kanaal van α7 nAChR's, maar heeft geen effect op de ionselectiviteit en relatief weinig, of geen, effect op de unitaire geleidbaarheid. Wanneer toegepast op acute hippocampale plakjes, verhoogt deze chemische stof de frequentie van door ACh opgewekte GABAerge postsynaptische stromen gemeten in piramidale neuronen; dit effect wordt onderdrukt door TTX, wat suggereert dat het de functie van α7 nAChR's moduleert die zich bevinden op het somatodendritische membraan van hippocampale interneuronen. Naast de positieve modulatie van α7 nAChR, induceert deze verbinding een diepgaande vertraging van de kinetiek van desensitisatie, wat de potentie van Ca2+-geïnduceerde toxiciteit door overmatige stimulatie van α7 nAChR verhoogt. Het veroorzaakt veranderingen in cysteïnetoegankelijkheid bij de binnenste bèta-sheet, de overgangszone en de agonistbindplaats terwijl het bindt aan α7 nAChR. Bindplaatsen voor deze chemische stof bevinden zich niet in de agonistbindplaatsen en het versterkt de door agonist opgewekte gating van nicotinereceptoren door conformationele effecten te bewerkstelligen die vergelijkbaar maar niet identiek zijn aan de gatingconformaties die door Ach worden bevorderd.
In Vivo Systemische toediening van PNU-120596 (1 mg/kg) aan ratten verbetert het auditieve gating-tekort veroorzaakt door amfetamine, een model dat wordt voorgesteld om een verstoring op circuitniveau geassocieerd met schizofrenie te weerspiegelen. Wanneer toegediend vóór carrageen, vermindert 30 mg/kg van deze verbinding de mechanische hyperalgesie en gewichtsdraagtekorten significant gedurende maximaal 4 uur. Deze chemische stof vermindert de carrageen-geïnduceerde toename van TNF-α- en IL-6-niveaus in het oedeem van de achterpoot; diclofenac verminderde alleen de IL-6-niveaus. Gevestigde mechanische hyperalgesie geïnduceerd door carrageen of CFA wordt ook gedeeltelijk omgekeerd door dit middel.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • Ca2+ Fluorescentie Assay

    SH-EP1 humane epitheelcellen die een variant van de α7 nAChR (α7*) tot expressie brengen, worden gekweekt in minimaal essentieel medium (MEM) dat niet-essentiële aminozuren bevat, aangevuld met 10% foetaal runderserum, L-glutamine, 100 U/ml penicilline/streptomycine, 250 ng/ml fungizon, 400 μg/ml hygromycine B en 800 μg/ml geneticine. α7* is een variant van de menselijke α7 nAChR, met twee puntmutaties in het eerste transmembraandomein (T230P en C241S) die een hoge functionele expressie in SH-EP1-cellen mogelijk maken [Groppi VE, Wolfe ML, Berkenpas MB (2003) U.S. Patent 6,693,172 B1]. Cellen worden gekweekt in een incubator van 37 °C met 6% CO2. Cellen worden getrypsiniseerd en geplaatst in 96-well platen met donkere zijwanden en heldere bodems met een dichtheid van 2 × 104 cellen/well 2 dagen voor analyse. Cellen worden geladen met een mengsel van Calcium reen-1AM in watervrije dimethylsulfoxide en 20% pluronic F-127. Dit reagens wordt rechtstreeks aan het groeimedium van elke well toegevoegd om een uiteindelijke concentratie van 2 μM Calcium Green-1 AM te bereiken. Cellen worden vervolgens 1 uur geïncubeerd in de kleurstof bij 37 °C en daarna vier keer gewassen met Mark's gemodificeerde Earle's gebalanceerde zoutoplossing (MMEBSS), bestaande uit het volgende (in mM): 4 CaCl2, 0.8 MgSO4, 20 NaCl, 5.3 KCl, 5.6 D-glucose, 20 Tris-HEPES, en 120 N-methyl-D-glucamine, pH 7.4. Na de vierde cyclus mogen de cellen minimaal 10 minuten incuberen bij 37 °C. Het uiteindelijke volume MMEBSS in elke well is 100 μL en atropine wordt aan alle wells toegevoegd voor een uiteindelijke concentratie van 1 μM. Een fluorometrische imaging plate reader (FLIPR; Molecular Devices, Union City, CA) is ingesteld om Calcium Green te exciteren bij 488 nm met 500 mW vermogen en fluorescentie-emissie van >525 nm te meten. Een belichting van 0,5 seconden wordt gebruikt om elke well te belichten. Fluorescentie wordt gedetecteerd met een F-stop ingesteld op 2.0 of 1.2. Na 30 seconden basislijnregistratie worden testverbindingen aan elke well van een 96-well plaat toegevoegd in 50 μL van een 3 × stock. In elk experiment worden vier wells gebruikt als vehikel (0,2% DMSO) controles.
Celassay:[2]
  • Cellijnen

    SH-SY5Y-α7 cells

  • Concentraties

    3-10 μM

  • Incubatietijd

    24 hours

  • Methode

    SH-SY5Y-α7 cells are plated on 96-well plates at a density of 15,000 cells per well (100 μL of 1.5 × 105 cells per mL) in complete growth medium and placed into a 37 °C incubator for 20 to 24 hours. Complete growth medium then is replaced with experimental medium alone ("PNU-120596 free") or containing appropriate concentrations of this compound and returns to the 37 °C ncubator for 20 to 24 hours. The medium is then replaced with fresh experimental medium and 20 μL per well MTS solution and returned to the 37 °C incubator for 3 hours, after which the plate is read on a microplate spectrophotometer at an absorbance of 490 nm. For all data analysis, data are normalized to untreated compound-free wells (100% cell viability) and a background absorbance taken from wells containing experimental medium and MTS solution.
Dierstudie:[1]
  • Dierlijke modellen

    male Sprague Dawley rats (weighing 250–300 g)

  • Doseringen

    1 mg/kg

  • Toediening

    PNU-120596 is intravenously administrated 5 minutes before auditory gating measurements.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15858066/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17470817/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19411608/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536953/

Klantproductvalidatie

<p>C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.<br /> </p>

, , PLoS One, 2013, 8(8): e73581.

PNU-120596 significantly reduces the size of brain injury induced by focal cerebral ischemia. Focal cerebral ischemia was induced by a transient (90 min) middle cerebral artery occlusion (MCAO). Then, 6 hrs post-MCAO, animals were given i.v. injections of either 1 mg/kg PNU-120596 dissolved in DMSO at 50 mM (i.e., treated group; n=10) or the matched amount of DMSO only (i.e., untreated group; n=10). Typical examples of injured whole-brain coronal sections (2 mm thick) obtained from untreated (i.e., DMSO only) (A) and treated (1 mg/kg PNU-120596) (B) animals. Treated and untreated animals were anesthetized and euthanized 24 hrs after MCAO (i.e., 18 hrs after PNU-120596 or DMSO injections) and brain sections were prepared for histological analysis. C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.

Gegevens van [ , , PLoS One, 2013, 8(8):e73581. ]

Sellecks PNU-120596 Is geciteerd door 9 Publicaties

Systemic Administration of α7-Nicotinic Acetylcholine Receptor Ligands Does Not Improve Renal Injury or Behavior in Mice With Advanced Systemic Lupus Erythematosus [ Front Med (Lausanne), 2021, 8:642960] PubMed: 33928103
Inhibitory effect of sinomenine on lung cancer cells via negative regulation of α7 nicotinic acetylcholine receptor [ J Leukoc Biol, 2020, 10.1002/JLB.6MA0720-344RRR] PubMed: 32726882
Alpha 7 nicotinic receptor agonist and positive allosteric modulators improved social and molecular deficits of MK-801 model of schizophrenia in rats. [ Pharmacol Biochem Behav, 2020, 10.1016/j.pbb.2020.172916] PubMed: 32220620
Investigating the Binding Interactions of NS6740, a Silent Agonist of the Nicotinic Receptor [ Mol Pharmacol, 2019, 10.1124/mol.119.116244] PubMed: 31175182
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia. [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2017, 54(3):2045-2059] PubMed: 26910820
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2016, 10.1007/s12035-016-9796-3] PubMed: 26910820
An Unaltered Orthosteric Site and a Network of Long-Range Allosteric Interactions for PNU-120596 in α7 Nicotinic Acetylcholine Receptors [ Chem Biol, 2015, 22(8):1063-73] PubMed: 26211363
A positive allosteric modulator of α7 nAChRs augments neuroprotective effects of endogenous nicotinic agonists in cerebral ischaemia [ Br J Pharmacol, 2013, 169(8):1862-78] PubMed: 23713819
A Type-II Positive Allosteric Modulator of α7 nAChRs Reduces Brain Injury and Improves Neurological Function after Focal Cerebral Ischemia in Rats. [Sun F, et al. PLoS One, 2013, 8(8): e73581] PubMed: 23951360

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.