HS-1371

N° de catalogueS8775 Lot:S877501

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Données techniques

Formule

C₂₄H₂₄N₄O

Poids moléculaire

384.47

N° CAS

2158197-70-5

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

13 mg/mL (33.81 mM)

Ethanol

4 mg/mL (10.4 mM)

Water

Insoluble

In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

HS-1371 est un puissant inhibiteur de RIP3 kinase avec une IC50 de 20,8 nM. Il se lie à la poche de liaison de l'ATP de RIP3 et inhibe la liaison de l'ATP pour empêcher l'activité enzymatique de RIP3 in vitro.

Cibles

RIP3 kinase

20.8 nM

In vitro

HS-1371 montre un effet inhibiteur sur l'autophosphorylation S227 de RIP3 au niveau basal. Il présente un effet inhibiteur complet sur la signalisation de la nécroptose induite par le TNF, ne montrant aucune phosphorylation de RIP3 et MLKL dans les cellules HT-29. L'inhibition de l'activité de RIP3 kinase par ce composé bloque la formation du complexe nécrosome, montrant une perturbation du recrutement de MLKL. Ce produit chimique sauve les cellules de la nécroptose induite par le TNF. Il sauve les cellules de la mort cellulaire nécroptotique dépendante de RIP3, mais pas de la mort cellulaire Apoptosis.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Tests enzymatiques Les activités inhibitrices de tous les composés vis-à-vis de RIP3 ont été mesurées par Reaction Biology Corp au moyen d'essais kinases radiométriques ([γ-32P]ATP). L'activité enzymatique de RIP3 a été surveillée en utilisant 20 µM de protéine basique de la myéline (MBP) dissoute dans un tampon de réaction fraîchement préparé (20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,02% BRIJ-35, 0,02 mg/mL BSA, 0,1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO). Chaque inhibiteur putatif de RIP3 a été dissous dans 100% de DMSO à des concentrations spécifiques et dilué en série avec epMotion 5070 dans le DMSO. RIP3 humain et 20 µM de substrat peptidique (MBP) ont été ajoutés au tampon de réaction. Après l'ajout de l'inhibiteur candidat dissous dans le DMSO au mélange de réaction de la kinase en utilisant la technologie acoustique (Echo550 ; gamme nanolitres), le mélange de réaction a été incubé pendant 20 minutes à température ambiante. Pour initier la réaction enzymatique, du 33P-ATP avec une activité spécifique de 10 µCi/µL a été ajouté au mélange de réaction pour atteindre une concentration finale d'ATP de 10 µM. La radioactivité a ensuite été surveillée en utilisant la méthode de liaison sur filtre après incubation du mélange de réaction pendant 2 heures à température ambiante. À des concentrations données d'inhibiteur, la puissance biochimique a été mesurée par le pourcentage d'activité kinase restante par rapport à la réaction du véhicule (diméthylsulfoxyde). Les ajustements de courbes et les valeurs d'IC50 ont ensuite été obtenus à l'aide du programme PRISM. L'inhibiteur compétitif de l'ATP, la staurosporine (STSP), a été utilisé comme contrôle positif dans cette étude en raison de sa forte puissance biochimique contre diverses kinases, y compris RIP3.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires HT-29 cells Concentrations 5 μM Temps dincubation 2 h Méthode HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Test kinase :^{^[1]}

Tests enzymatiques
Les activités inhibitrices de tous les composés vis-à-vis de RIP3 ont été mesurées par Reaction Biology Corp au moyen d'essais kinases radiométriques ([γ-32P]ATP). L'activité enzymatique de RIP3 a été surveillée en utilisant 20 µM de protéine basique de la myéline (MBP) dissoute dans un tampon de réaction fraîchement préparé (20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,02% BRIJ-35, 0,02 mg/mL BSA, 0,1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO). Chaque inhibiteur putatif de RIP3 a été dissous dans 100% de DMSO à des concentrations spécifiques et dilué en série avec epMotion 5070 dans le DMSO. RIP3 humain et 20 µM de substrat peptidique (MBP) ont été ajoutés au tampon de réaction. Après l'ajout de l'inhibiteur candidat dissous dans le DMSO au mélange de réaction de la kinase en utilisant la technologie acoustique (Echo550 ; gamme nanolitres), le mélange de réaction a été incubé pendant 20 minutes à température ambiante. Pour initier la réaction enzymatique, du 33P-ATP avec une activité spécifique de 10 µCi/µL a été ajouté au mélange de réaction pour atteindre une concentration finale d'ATP de 10 µM. La radioactivité a ensuite été surveillée en utilisant la méthode de liaison sur filtre après incubation du mélange de réaction pendant 2 heures à température ambiante. À des concentrations données d'inhibiteur, la puissance biochimique a été mesurée par le pourcentage d'activité kinase restante par rapport à la réaction du véhicule (diméthylsulfoxyde). Les ajustements de courbes et les valeurs d'IC50 ont ensuite été obtenus à l'aide du programme PRISM. L'inhibiteur compétitif de l'ATP, la staurosporine (STSP), a été utilisé comme contrôle positif dans cette étude en raison de sa forte puissance biochimique contre diverses kinases, y compris RIP3.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
HT-29 cells
Concentrations
5 μM
Temps dincubation
2 h
Méthode
HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30237400/

De Selleck HS-1371 A été cité par 3 Publications

MRE11 liberates cGAS from nucleosome sequestration during tumorigenesis [ Nature, 2024, 625(7995):585-592]	PubMed: 38200309
Necroptotic virotherapy of oncolytic alphavirus M1 cooperated with Doxorubicin displays promising therapeutic efficacy in TNBC [ Oncogene, 2021, 10.1038/s41388-021-01869-4]	PubMed: 34155344
Inhibition of Cardiac RIP3 Mitigates Early Reperfusion Injury and Calcium-Induced Mitochondrial Swelling without Altering Necroptotic Signalling [ Int J Mol Sci, 2021, 22(15)7983]	PubMed: 34360749

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