BMS-345541

BMS-345541 inhibe de manière dose-dépendante la phosphorylation de IκBα stimulée par le TNF-α dans les cellules monocytaires THP-1 avec une IC50 d'environ 4 μM. Ce composé inhibe le facteur de nécrose tumorale α, l'interleukine-1β, l'interleukine-8 et l'interleukine-6 stimulés par le lipopolysaccharide dans les cellules THP-1 avec des valeurs d'IC50 dans la plage de 1 à 5 μM. Il se lie de manière mutuellement exclusive par rapport à un inhibiteur peptidique correspondant aux acides aminés 26 à 42 de IκBα avec les Ser-32 et Ser-36 remplacés par des aspartates et de manière non mutuellement exclusive par rapport à l'ADP. Ce produit chimique se lie à des sites allostériques similaires sur IKK-1 et IKK-2, ce qui affecte ensuite différemment les sites actifs des sous-unités. [1] Il affecte plusieurs transitions du cycle cellulaire mitotique, y compris l'entrée mitotique, la progression de la prométaphase à l'anaphase et la cytocinèse. L'ajout de ce composé aux cellules libérées de l'arrêt en phase G bloque l'activation d'Aurora A, B et C, l'activation de Cdk1 et la phosphorylation de l'histone H3. Le traitement des cellules mitotiques avec ce produit chimique entraîne une dégradation précoce de la cycline B1 et de la sécurine, une séparation chromosomique défectueuse et une cytocinèse inappropriée. Il est également constaté qu'il contourne le point de contrôle du fuseau dans les cellules arrêtées par le nocodazole. Ces effets ne sont pas principalement dus à un effet inhibiteur direct de ce composé sur les kinases mitotiques telles que Cdk1, Aurora A ou B, Plk1 ou NEK2. [2] Ce composé (10 μM) inhibe la croissance des mélanocytes épidermiques humains normaux et des cellules de mélanome métastatique (SK-MEL-5, A375 et Hs 294T) de 96 % et 99 % à 72h, respectivement. L'application de 100 μM de celui-ci à la culture cellulaire SK-MEL-5 entraîne 87 % de cellules apoptotiques à 24 h par une voie mitochondriale indépendante de la caspase et dépendante de l'AIF. Le traitement avec ce produit chimique (10 μM) entraîne une réduction de 76 % et 95 % des activités IKK et de l'activité NF-κB, ainsi que de la production de CXCL1. [3] Il inhibe la croissance des lignées cellulaires de leucémie aiguë lymphoblastique à cellules T (T-ALL) BE-13, RPMI-8402 et DND-41, toutes trois abritant une mutation Notch1, et des cellules primaires de T-ALL de patients pédiatriques, avec des IC50 de 2-6 μM. 5 μM de ce composé induit un arrêt en phase G2/M du cycle cellulaire dans les cellules BE-13 et DND-41, et une augmentation du pic sub-G1 dans les cellules RPMI-8402. 5 μM de celui-ci traité pendant 16 h conduit à une augmentation des cellules apoptotiques dans toutes ces cellules, accompagnée d'un clivage temps-dépendant de la procaspase-8, de la procaspase-3 et de la poly (ADP-ribose) polymérase (PARP). Ce produit chimique (5 μM) induit une déphosphorylation temps-dépendante de IκBα et p65. Les cellules T-ALL traitées avec celui-ci présentent une translocation nucléaire de FOXO3a et la restauration de ses fonctions, y compris le contrôle des niveaux d'expression de p21^Cip1. [4] Il inhibe l'expression induite par le TNFα de ICAM-1 et VCAM-1 dans les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine avec une IC50 de 5 μM. [5]

BMS-345541 inhibe efficacement la croissance tumorale du mélanome de manière dose-dépendante. Les souris porteuses de tumeurs traitées avec 75 mg/kg de ce composé montrent une inhibition efficace de la croissance des tumeurs SK-MEL-5, A375 et Hs 294T de 86 %, 69 % et 67 %, respectivement, par rapport aux animaux témoins traités uniquement avec le véhicule. [3] Ce composé administré par voie orale à des doses de 100 mg/kg, réduit la gravité de la colite induite par le sulfate de dextran sodique chez les souris avec un rapport pondéral, un score clinique des côlons, un score moyen de lésion et un score moyen d'inflammation de 0,86 (vs 0,77 du groupe véhicule), 1,0 (vs 2,5 du groupe véhicule), 5,66 (vs 8,52 du groupe véhicule), 6,82 (vs 12,33 du groupe véhicule), respectivement. [6] Ce produit chimique (100 mg/kg), lorsqu'il est administré par gavage oral dans l'eau une fois par jour à partir du moment de la première immunisation au collagène, inhibe les signes cliniques de la maladie dans le modèle murin de CIA (0 vs ~8 du groupe véhicule), accompagné d'une réduction de l'œdème des pattes. Il réduit le score cumulatif de lésion arthritique de 4,4 à 0, accompagné d'une dégradation plus faible des articulations tibiotarsiennes et de la gravité de l'inflammation, de l'hyperplasie synoviale, de la résorption osseuse et de l'érosion du cartilage. Aucune lésion discernable n'est observée dans les articulations des animaux, ce qui est histologiquement indiscernable de celles d'animaux témoins appariés par l'âge et exempts de maladie. Ce composé inhibe de manière dose-dépendante le message IL-1β, les animaux du groupe de dose de 100 mg/kg présentant des niveaux comparables à ceux des animaux témoins exempts de maladie. [7]

• Tests enzymatiques

  Les tests mesurant la phosphorylation de GST-IκBα catalysée par l'enzyme sont effectués en ajoutant l'enzyme (une concentration finale de 0,5 μg/mL) à 30 ℃ à des solutions de 100 μg/mL de GST-IκBα et 5 μM de [³³P]ATP dans 40 mM de Tris HCl, pH 7,5, contenant 4 mM de MgCl₂, 34 mM de phosphate de sodium, 3 mM de NaCl, 0,6 mM de phosphate de potassium, 1 mM de KCl, 1 mM de dithiothréitol, 3 % (p/v) de glycérol et 250 μg/mL d'albumine sérique bovine. L'activité spécifique de [³³P]ATP utilisée dans le test est de 100 Ci/mmol. Après 5 min, les réactions de la kinase sont arrêtées par l'ajout de 2× tampon d'échantillon de Laemmli et traitées à la chaleur à 90 ℃ pendant 1 min. Les échantillons sont ensuite chargés sur des gels NuPAGE 10 % BisTris. Après la SDS-PAGE, les gels sont séchés sur un sécheur de gels. Les bandes sont ensuite détectées à l'aide d'un PhosphorImager 445Si, et la radioactivité est quantifiée à l'aide du logiciel ImageQuant. Dans ces conditions, le degré de phosphorylation de GST-IκBα est linéaire avec le temps et la concentration de l'enzyme.

• Lignées cellulaires

  Metastatic human melanoma cells SK-MEL-5

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  3 days

• Méthode

  1×10⁵ cells per well are plated in six-well plates with 10% fetal bovine serum medium overnight to allow cell adhesion. Cells ae cultured in medium containing BMS-345541 for 72 hours of treatment. Cells are counted with a hemocytometer.

• Modèles animaux

  Human melanoma xenografts SK-MEL-5

• Dosages

  75 mg/kg

• Administration

  orally administered by gavage