(R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid

N° de catalogueS2812 Lot:S281201

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Données techniques

Formule

C30H30O8.C2H4O2
Poids moléculaire 578.61 N° CAS 866541-93-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 116 mg/mL (200.48 mM)
Ethanol 89 mg/mL (153.81 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description L'acide (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acétique, l'énantiomère R-(-) de l'acide Gossypol acétique, se lie à Bcl-2, Bcl-xL et Mcl-1 avec un Ki de 0,32 μM, 0,48 μM et 0,18 μM dans des essais sans cellules ; n'inhibe pas le domaine BIR3 et BID. L'AT-101 déclenche simultanément l'apoptosis et un type d'autophagy cytoprotectrice. Phase 2.
Cibles
Mcl-1
(Cell-free assay)		 Bcl-2
(Cell-free assay)		 Bcl-xL
(Cell-free assay)
0.18 μM(Ki) 0.32 μM(Ki) 0.48 μM(Ki)
In vitro L'AT-101 inhibe un panel de différentes malignités lymphoprolifératives avec des CI50 allant de 1,2 μM à 7,4 μM. L'AT-101 (10 μM) perturbe le Δψm de manière concentration- et temps-dépendante dans les lignées de lymphome diffus à grandes cellules B et de lymphome à cellules du manteau. L'AT-101 (1 μM ou 2 μM) combiné au carfilzomib (6 nM ou 10 nM) induit l'Apoptosis dans les lignées cellulaires HBL-2 et Granta. L'AT-101 (20 μM pendant 24 heures) entraîne une Apoptosis médiane de 72 % et une régulation négative de Mcl-1 dans les lymphocytes de la LLC en culture en suspension ainsi qu'en coculture stromale. Les cellules stromales expriment des niveaux indétectables d'antiapoptotique mais des niveaux élevés de protéines ERK et AKT activées et présentent peu ou pas d'Apoptosis avec l'AT-101. L'AT-101 induit l'Apoptosis de manière temps- et dose-dépendante, avec des valeurs ED50 de 1,9 mM et 2,4 mM dans les cellules Jurkat T et U937, respectivement. L'AT-101 (10 μM) combiné à l'irradiation (32 Gy) induit plus d'Apoptosis que l'irradiation seule et dépasse la somme des effets causés par les traitements à agent unique. L'AT-101 active SAPK/JNK de manière dose- et temps-dépendante. L'AT-101 (10 µM) induit l'Apoptosis par l'activation des caspases-9, -3 et -7 dans les cellules VCaP. L'AT-101 (10 µM) diminue l'expression de Bcl-2 et Mcl-1 dans les cellules VCaP. L'AT-101 (< 20 μM) est capable d'inhiber la croissance des cellules du myélome multiple malgré les effets de croissance stimulants fournis par les cellules stromales dans le milieu de la moelle osseuse. L'AT-101 (10 μM) induit l'Apoptosis dans les cellules du myélome multiple via l'activation des caspases 3, des caspases 9 et de la PARP. L'AT-101 (10 μM) favorise l'Apoptosis dans les cellules du myélome multiple en perturbant le rapport Bax/Bcl-2 et le potentiel membranaire mitochondrial.
In Vivo L'AT-101 est toujours détectable dans le plasma avec des concentrations moyennes de 0,49 μM pour le groupe de 35 mg/kg et de 0,39 μM pour le groupe de 200 mg/kg chez des souris SCID beige porteuses de xénogreffes de RL-DLBCL. La concentration plasmatique maximale d'AT-101 est observée après 30 minutes d'administration du médicament aux deux niveaux de dose, le groupe de 200 mg/kg montrant une concentration plasmatique moyenne près de 4 fois supérieure à celle du groupe de 35 mg/kg (respectivement 7,88 μM et 27,78 μM) chez les souris SCID beige. L'AT-101 (25 mg/kg à 100 mg/kg, par voie orale) entraîne indéfiniment un début plus précoce d'une perte de poids équivalente à plus de 10 % du poids avant le traitement et la mort chez les souris SCID beige. L'AT-101 (35 mg/kg, par voie orale par jour pendant 10 jours) plus du cyclophosphamide intrapéritonéal (Cy) et du rituximab intrapéritonéal (R) montrent un contrôle significatif du volume tumoral par rapport à tout autre groupe de traitement. L'AT-101 (15 mg/kg, p.o., 5 jours/semaine) en tant qu'agent unique chez des souris intactes réduit significativement le développement de la croissance tumorale du VCaP par rapport aux tumeurs non traitées aux semaines 2 à 6. L'AT-101 en combinaison avec la castration chirurgicale retarde le début de la croissance tumorale du VCaP androgyne-indépendante par rapport aux groupes de castration seule ou d'AT-101 seule chez les souris.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Essai de liaison basé sur la polarisation de fluorescence

    Pour les expériences de liaison compétitive, la protéine Bcl-2 (40 nM) et le peptide FAM-Bid (2,5 nM) sont préincubés dans le tampon d'essai (100 mM phosphate de potassium, pH 7,5 ; 100 μg/mL gamma globuline bovine ; 0,02 % d'azide de sodium, 5 μL d'une solution d'AT101 dans du DMSO sont ajoutés à la solution Bcl-2/FAM-Bid dans des plaques Dynex de 96 puits, noires, à fond rond pour produire un volume final de 125 μL. Pour chaque expérience, un contrôle contenant Bcl-2 et le peptide Flu-Bid (équivalent à 0 % d'inhibition), et un autre contrôle contenant uniquement FAM-Bid, sont inclus sur chaque plaque d'essai. Après 4 heures d'incubation, les valeurs de polarisation en unités de millipolarisation (mP) ont été mesurées à une longueur d'onde d'excitation de 485 nm et une longueur d'onde d'émission de 530 nm à l'aide du lecteur de plaque Ultra. L'IC50, la concentration d'inhibiteur à laquelle 50 % du peptide lié est déplacé, est déterminée à partir du graphique à l'aide d'une analyse des moindres carrés non linéaire et d'un ajustement de courbe réalisé avec le logiciel GraphPad Prizm 4. Le peptide Bid BH3 non marqué est utilisé comme contrôle positif. PF pour la protéine Bcl-xL, le peptide Bak BH3 marqué avec de l'ester succinimidyl de 6-carboxyfluorescéine (FAM-Bak) au lieu du FAM-Bim pour maximiser le signal. Il est déterminé que le FAM-Bak a un Kd de 6 nM pour la protéine Bcl-xL. L'essai de liaison compétitive pour Bcl-xL est le même que celui pour Bcl-2 avec les exceptions suivantes : 30 nM de protéine Bcl-xL et 2,5 nM de peptide FAM-Bak dans le tampon d'essai suivant : 50 mM Tris-Bis, pH 7,4 et 0,01 % de gamma globuline bovine. PF pour la protéine Mcl-1, le peptide FAM-Bid et la protéine Mcl-1 humaine sont utilisés. Il est déterminé que le peptide FAM-Bid se lie à la protéine Mcl-1 humaine avec un Kd de 1,71 nM. Les essais de liaison compétitive pour Mcl-1 sont réalisés de la même manière que pour Bcl-2 avec les exceptions suivantes : 5 nM de Mcl-1 et 1 nM de peptide Flu-Bid dans le tampon d'essai suivant : 25 mM Tris, pH 8,0 ; 150 mM NaCl et 0,05 % d'acide Pluronic.
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    RL, H9, SKI, HBL-2, Granta and JJN-3 cell lines

  • Concentrations

    ~10 μM

  • Temps dincubation

    72 hours

  • Méthode

    Cells are counted and resuspended at an approximate concentration of 3×105 cells/well in a 24-well plate. AT-101 is diluted in DMSO that is maintained at a final concentration of less than 0.5%. Concentrations of AT-101 from 1 nM to 10 μM are used in most experiments. Following incubation at 37 ℃ in a 5% CO2 humidified incubator, 100 μL from each well is transferred to a 96-well opaque-walled plate; cell-Titer-Glo Reagent is added in a 1:1 ratio. Contents are mixed for 2 minutes on an orbital shaker to induce cell lysis. The plates are allowed to incubate at room temperature for 10 minutes before recording luminescence with a Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader. In the schedule dependency experiments, serial dilutions of each drug are prepared in ratios relative to their IC50. Cells are preincubated with AT-101 for up to 72 hours, while 4-HC is added for a 24-hour period, being added at time 0, 24 hours, and 48 hours from the start of incubation. Each experiment is performed in triplicate and repeated at least twice.
Étude animale :[2]
  • Modèles animaux

    SCID beige mice bearing RL-DLBCL xenograft

  • Dosages

    100 mg/kg

  • Administration

    Oral gavage

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17034116/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18292288/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18836097/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19852810/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18084610/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18346839/

Validation du produit par le client

<p>(B and C) assessment of antimigration capacity in each group by transwell migration assay. Abbreviations: CDDP, cisplatin; DMSO, dimethyl sulfoxide.</p>

, , Drug Des Devel Ther, 2014, 8:2517-29.

The cellular autophagy induced by the concentration of AT101 (5 μM) and APE1 siRNA was examined by confocal microscopy with the application of Cyto-IDr autophagy detection kit.

Données de [ , , Oncotarget, 2016, 7(23):34430-41 ]

Effect of AT-101 (AT) on MM cell lines survival. The survival of human (MM-B1, H-Meso-1, and MM-F1) and mouse (#40a) MM cell lines were assessed by the SRB assay after 24, 48, and 72 h of treatment with DMSO or AT-101. The percentage of surviving cells treated with the compound was calculated by normalizing the OD value to that of the control cultures (DMSO). The results are expressed as the means ± SD of three independent experiments performed in triplicate (xp ≤ 0.05, ∗p ≤ 0.01, #p ≤ 0.001 compared with the cultures treated with DMSO).

Données de [ , , Front Pharmacol, 2018, 9:1269 ]

AT-101 enhances the antimigration ability of CDDP in A549 cells exposed to A549 cell-conditioned medium. Notes: (A) The cell migration assay was conducted using Transwell® plates. A549 cells were treated with the control vehicle, 5 μM CDDP, 5 μM AT-101, or 5 μM AT-101 plus 5 μM CDDP and the supernatants were collected as the tumor conditioned medium. A549 cells were suspended in serum-free Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium. A549 cells were seeded to the upper chambers, and the lower chambers were filled with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum or tumor conditioned medium. After incubation for 18 hours at 37°C, cells were fixed, stained, and analyzed under inverted light microscopy (40× magnification). The number of migrated cells was counted using an inverted microscope. (B) Bar graph showing the migrating cell numbers of different treatment groups. Data are presented as the mean ± standard deviation of at least three independent experiments. **P<0.01 by one-way analysis of variance. Abbreviation: CDDP, cisplatin.

Données de [ , , Drug Des Devel Ther, 2015, 9:2887-910 ]

De Selleck (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid A été cité par 20 Publications

Follicle stimulating hormone controls granulosa cell glutamine synthesis to regulate ovulation [ Protein Cell, 2024, pwad065] PubMed: 38167949
Pharmacological Targeting of Bcl-2 Induces Caspase 3-Mediated Cleavage of HDAC6 and Regulates the Autophagy Process in Colorectal Cancer [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6662] PubMed: 37047634
Exploiting ulnerabilities induced b recurrent mutations in chondrosarcoma and giant cell tumour of bone: therapeutic targeting of the altered epigenome and be [ Leiden University The Netherlands, 2023, ] PubMed: None
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Lactate Dehydrogenase B Is Required for Pancreatic Cancer Cell Immortalization Through Activation of Telomerase Activity [ Front Oncol, 2022, 12:821620] PubMed: 35669414
Gossypol Acetic Acid Attenuates Cardiac Ischemia/Reperfusion Injury in Rats via an Antiferroptotic Mechanism [ Biomolecules, 2021, 11(11)1667] PubMed: 34827665
AT101 [(-)-Gossypol] Selectively Inhibits MCL1 and Sensitizes Carcinoma to BH3 Mimetics by Inducing and Stabilizing NOXA [ Cancers (Basel), 2020, 12(8):E2298] PubMed: 32824203
Using CETSA assay and a mathematical model to reveal dual Bcl-2/Mcl-1 inhibition and on-target mechanism for ABT-199 and S1. [ Eur J Pharm Sci, 2020, 142:105105] PubMed: 31669390
Comparison of putative BH3 mimetics AT-101, HA14-1, sabutoclax and TW-37 with ABT-737 in platelets. [ Platelets, 2020, 10.1080/09537104.2020.1724276] PubMed: 32079453
Effect of Exosomal APE1 on Sensitivity of NSCLC A549 Cells to Cisplatin [ Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, (7): 492-497] PubMed: None

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