In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
UNC0638 is een potente, selectieve en celpenetrerende chemische probe voor G9a en GLP Histone Methyltransferase met een IC50 van respectievelijk <15 nM en 19 nM, en toont selectiviteit over een breed scala aan Epigenetics en niet-epigenetische doelwitten. Deze verbinding heeft Antiviral activiteiten.
Doelen
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
UNC0638 is een potente, selectieve en celpenetrerende chemische probe voor G9a en GLP, met een toxiciteit/functie-verhouding van >100, vergeleken met <6 voor BIX01294. Deze verbinding is een selectieve remmer van G9a en GLP over een breed scala aan epigenetische en niet-epigenetische doelwitten. Het is meer dan 10.000-voudig selectief tegen SET7/9 (een H3K4 HMTase), SET8 (een H4K20 HMTase), PRMT3 en SUV39H2. In MDA-MB-231-cellen vermindert deze chemische stof (48 uur blootstelling) de H3K9me2-niveaus op een concentratieafhankelijke manier met een IC50 van 81 nM. De behandeling van een verscheidenheid aan cellijnen resulteert in lagere globale H3K9me2-niveaus, equivalent aan niveaus waargenomen voor kleine haarspeld-RNA-knockdown van G9a en GLP, waarbij de functionele potentie van deze verbinding goed gescheiden is van zijn toxiciteit. Het vermindert de clonogeniciteit van MCF7-cellen aanzienlijk, vermindert de abundantie van H3K9me2-markeringen bij promotors van bekende G9a-gereguleerde endogene genen en beïnvloedt onevenredig verschillende genomische loci die microRNA's coderen. In embryonale stamcellen van muizen reactiveert deze probe G9a-silenced genen en een retroviraal reportergen op een concentratieafhankelijke manier zonder differentiatie te bevorderen.
In Vivo
In studies naar het metabolisme en de farmacokinetiek van geneesmiddelen bij muizen had UNC0638 een hoge klaring, korte halfwaardetijd, hoog distributievolume en lage blootstelling na intraveneuze, orale of intraperitoneale toediening. Hoewel deze verbinding waarschijnlijk niet geschikt is voor in vivo dierstudies vanwege de lage blootstellingsniveaus, maakt de hoge stabiliteit onder cellulaire testomstandigheden, in combinatie met hoge potentie en selectiviteit, het een ideaal chemisch hulpmiddel voor celgebaseerde studies.
Deze test maakt gebruik van SAHH om het methyltransferproduct S-adenosylhomocysteïne te hydrolyseren tot homocysteïne en adenosine in aanwezigheid van adenosine deaminase dat adenosine omzet in inosine. De homocysteïneconcentratie wordt vervolgens bepaald door conjugatie van zijn vrije sulfhydrylgroep met een thiol-gevoelige fluorofoor, ThioGlo. Voor IC50-bepalingen worden testmengsels bereid in 25 mM kaliumfosfaatbuffer pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0.01% Triton X 100 met 5 μM SAHH, 0.3 U/mL adenosine deaminase, 25 μM SAM en 15 μM ThioGlo. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 en SUV39H2 worden getest bij respectievelijk 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 μM en 100 nM. UNC0638 wordt toegevoegd in concentraties variërend van 4 nM tot 16 μM. Na 2 minuten incubatie worden reacties geïnitieerd door toevoeging van de histonpeptiden: 10 μM H3(1-25) voor G9a, 20 μM H3(1-25) voor EHMT1, 100 μM H3(1-25) voor SETD7, 500 μM H4(1-24) voor SETD8, 10 μM H4(1-24) voor PRMT3 en 200 μM H3K9Me1 (1-15) voor SUV39H2. De methyleringsreactie wordt gevolgd door het monitoren van de toename in fluorescentie met behulp van een Biotek Synergy2 plaatlezer met 360/40 nm excitatie filter en 528/20 nm emissie filter gedurende 20 minuten in een 384-well plaatformaat. Activiteitswaarden worden gecorrigeerd door achtergrond veroorzaakt door het peptide of het eiwit af te trekken. IC50-waarden worden berekend met Sigmaplot. Standaarddeviaties worden berekend uit twee onafhankelijke experimenten.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
