Trametinib DMSO solvate (GSK1120212B)

Le GSK1120212 inhibe la phosphorylation de la MBP quelle que soit l'isotype de Raf et MEK, avec des IC50 allant de 0,92 nM à 3,4 nM. Le GSK1120212 ne démontre aucune inhibition des activités kinases de c-Raf, B-Raf, ERK1 et ERK2. De plus, le GSK1120212 ne montre pas d'activité inhibitrice drastique contre les 98 autres kinases. Le GSK1120212 présente une puissante activité inhibitrice contre les lignées cellulaires de cancer colorectal humain. Les cellules HT-29 et COLO205, connues pour avoir un mutant B-Raf constitutivement actif, sont les plus sensibles au GSK1120212 avec un IC50 de 0,48 nM et 0,52 nM, respectivement. Les lignées cellulaires portant une mutation K-Ras montrent un large éventail de sensibilité au GSK1120212 avec un IC50 de 2,2-174 nM. En revanche, les cellules COLO320 DM, portant le gène de type sauvage à la fois dans B-Raf et K-Ras, s'avèrent résistantes au GSK1120212 même à 10 μM. Un traitement au GSK1120212 pendant 24 heures induit un arrêt du cycle cellulaire en phase G1 dans toutes les lignées cellulaires sensibles. De manière cohérente, le traitement au GSK1120212 entraîne une régulation positive de p15INK4b et/ou p27KIP1 dans la plupart des lignées cellulaires de cancer colorectal. Le GSK1120212 inhibe la phosphorylation constitutive d'ERK dans toutes les lignées cellulaires sensibles. Le GSK1120212 induit l'apoptosis dans les cellules HT-29 et COLO205, mais les cellules COLO205 sont plus sensibles au GSK1120212 que les cellules HT-29 en termes d'induction de l'apoptosis.[1] Le GSK1120212 bloque la production de facteur de nécrose tumorale-α et d'interleukine-6 par les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC).[2]

L'administration orale de GSK1120212 à 0,3 mg/kg ou 1 mg/kg une fois par jour pendant 14 jours est efficace pour inhiber la croissance du xénogreffe HT-29, et 1 mg/kg de GSK1120212 bloque presque complètement l'augmentation de la tumeur. La phosphorylation d'ERK1/2 est complètement inhibée dans les tissus tumoraux établis par une seule dose orale de 1 mg/kg de GSK1120212, et les niveaux de protéines p15INK4b et p27KIP1 sont régulés à la hausse après 14 jours de traitement avec GSK1120212. Dans le modèle de xénogreffe COLO205, une régression tumorale est observée même à une dose de 0,3 mg/kg. À une dose de 1 mg/kg, une régression complète est obtenue chez 4 souris sur 6, où la tumeur dégénère au point que le volume tumoral n'est pas mesurable.[1] L'administration de GSK1120212 à 0,1 mg/kg supprime presque complètement l'arthrite induite par l'adjuvant (AIA) et l'arthrite induite par le collagène de type II (CIA) chez les rats Lewis ou les souris DBA1/J, respectivement.[2]

• Essai kinase de la cascade Raf-MEK-ERK

  La protéine basique de la myéline non phosphorylée (MBP) est revêtue sur une plaque ELISA, et la forme active de B-Raf/c-Raf est mélangée à MEK1/MEK2 non phosphorylée et à ERERK2 dans un tampon MOPS contenant 10 μM d'ATP et 12,5 mM de MgCl2 en présence de diverses concentrations de GSK1120212. La phosphorylation de la MBP est détectée par l'anticorps anti-phospho-MBP.

• Lignées cellulaires

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320 cells

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  3 or 4 days

• Méthode

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to GSK1120212. Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Modèles animaux

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosages

  ~1 mg/kg/day

• Administration

  o.g.