SM-164

SM-164 bindt aan XIAP met beide BIR-domeinen met een IC50 van 1,39 nM, wat respectievelijk 300 en 7000 keer potenter is dan zijn monovalente tegenhangers en het natuurlijke Smac AVPI-peptide. Deze verbinding richt zich op cellulair XIAP en induceert effectief apoptosis bij concentraties zo laag als 1 nM in de HL-60 leukemiecellijn. [1]

Dit chemische middel induceert caspase-8- en caspase-3-afhankelijke apoptosis in kankercellen. Het induceert ook TNF -afhankelijke apoptosis en cIAP-1 degradatie. [2]

Het is zeer synergistisch met TRAIL in vitro in zowel TRAIL-gevoelige als TRAIL-resistente kankercellijnen van borst-, prostaat- en darmkanker. Deze verbinding versterkt TRAIL-geïnduceerde apoptosis in kankercellen door amplificatie van de caspase-8-gemedieerde extrinsieke apoptosis route [3]

SM-164 induceert snelle cIAP-1 degradatie en sterke apoptosis in de MDA-MB-231 xenograft tumoreweefsels en bewerkstelligt tumorregressie, maar heeft geen toxiciteit in normale muizenweefsels. [2]

Deze verbinding induceert cIAP1-degradatie in tumorweefsels en verbetert de in vivo antitumoractiviteit van TRAIL drastisch, en de combinatie van dit chemische middel en TRAIL bewerkstelligt tumorregressie zonder toxiciteit voor dieren. [3]

• Bindingsassays.

  De FP-gebaseerde assay voor XIAP BIR3-eiwit wordt beschreven. Kortom, 5-carboxyfluoresceïne wordt gekoppeld aan de lysine-zijketen van een gemuteerd Smac-peptide met de sequentie en dit fluorescent gelabelde peptide (genaamd SM5F) wordt gebruikt als de fluorescerende tracer in FP-gebaseerde bindingsassays aan XIAP BIR3. De Kd-waarde van deze fluorescerende tracer is bepaald op 17,9 nM voor XIAP BIR3. In competitieve bindingsexperimenten wordt een getest compound geïncubeerd met 30 nM XIAP BIR3-eiwit en 5 nM SM5F in de assaybuffer (100 mM kaliumfosfaat, pH 7,5; 100 /ml rundergammaglobuline; 0,02 % natriumazide). De Kd-waarde van SM5F aan cIAP-1 BIR3-eiwit is bepaald op 4,1 nM. In competitieve bindingsexperimenten worden 10 nM cIAP-1 BIR3-eiwit en 2 nM SM5F-tracer gebruikt. De Kd-waarde van SM5F aan cIAP-2 BIR3-eiwit is bepaald op 6,6 nM. In competitieve bindingsexperimenten worden 25 nM cIAP-2 BIR3-eiwit en 2 nM SM5F-tracer gebruikt. Om de bindingsaffiniteiten van Smac-mimetica aan XIAP met zowel BIR2- als BIR3-domeinen te bepalen, is een FP-gebaseerde competitieve bindingsassay opgezet met behulp van een bivalente fluorescent gelabelde tracer, genaamd Smac-1F. De Kd-waarde van de bivalente gelabelde tracer aan XIAP met BIR2- en BIR3-domeinen is bepaald op 2,3 nM. In competitieve bindingsexperimenten wordt een getest compound geïncubeerd met 3 nM XIAP-eiwit met zowel BIR2- als BIR3-domeinen (residuen 120-356) en 1 nM in dezelfde assaybuffer.

• Cellijnen

  HT-29 cells

• Concentraties

  1 μM

• Incubatietijd

  6 or 12 h

• Methode

  Cells pre-treated with HG (5 μM) for 30 min were treatment with SM-164 (1 μM) for 6 or 12 h.

• Dierlijke modellen

  MDA-MB-231 xenografted SCID mice

• Doseringen

  1 and 5 mg/kg

• Toediening

  i.v.