Derazantinib

ARQ-087 présente une activité antiproliférative dans les lignées cellulaires induites par une dysrégulation du FGFR, y compris les amplifications, les fusions et les mutations. Les études du cycle cellulaire dans les lignées cellulaires présentant des niveaux élevés de protéine FGFR2 montrent une relation positive entre l'arrêt du cycle cellulaire en G1 induit par ARQ 087 et l'induction subséquente de l'apoptose. ARQ 087 inhibe l'autophosphorylation de FGFR1 et FGFR2 de manière dose-dépendante. Dans les cellules Cos-1 surexprimant les FGFR1, FGFR2, FGFR3 et FGFR4 de pleine longueur, ARQ 087 inhibe leur phosphorylation avec des valeurs EC50 respectivement de < 0,123 μM, 0,185 μM, 0,463 μM, >10 μM. ARQ 087 inhibe la kinase FGFR par un mécanisme compétitif de l'ATP, et est capable d'inhiber les formes inactive et entièrement active de la kinase FGFR. Par conséquent, ARQ 087 retarde l'activation du FGFR en inhibant son autophosphorylation, ainsi que l'inhibition de la kinase active phosphorylée[1].

ARQ 087 atténue la signalisation FGFR dans les tumeurs xénogreffées humaines SNU-16, entraînant une réduction du phospho-FGFR, du phospho-FRS2-α, et du phospho-ERK, tandis que la protéine FGFR2 totale n'est pas affectée. ARQ 087 est efficace pour inhiber la croissance tumorale in vivo dans des modèles de tumeurs xénogreffées SNU-16 et NCI-H716, avec des altérations et des fusions génétiques de FGFR2. ARQ 087 a démontré son efficacité dans plusieurs modèles de xénogreffes in vivo et a été bien toléré à des doses allant jusqu'à 75 mg/kg[1].

• Détermination du Ki et du mode d'inhibition

  L'activité inhibitrice de la kinase d'ARQ 087 a été déterminée pour les protéines recombinantes FGFR1 ou FGFR2 en utilisant un substrat peptidique PYK2 biotinylé et de l'ATP. ARQ 087 a été titré dans du DMSO en utilisant un schéma de dilution au 1/3, puis dilué 10 fois davantage dans de l'eau déionisée pour une concentration finale de DMSO de 10 %. Un volume (2,5 μL) de ces dilutions ou du véhicule a été ajouté à chaque puits d'une plaque de réaction. FGFR1 ou FGFR2 a été ajouté au tampon d'essai (50 mM Tris, pH 8,0, 0,02 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10 % de glycérol, 0,1 mM Na3PO4, 1 mM DTT) dans chaque puits dans un volume de 17,5 μL pour une concentration finale de 0,50 ou 0,25 nM, respectivement. Après une période de pré-incubation de 30 minutes, l'ATP et le substrat ont été ajoutés dans le tampon d'essai (5 μL) pour des concentrations finales de 0 à 1 000 μM d'ATP et de 80 nM de PYK2 biotinylé, pour un volume de réaction final de 25 μL. Les plaques ont été incubées pendant 60 minutes à température ambiante, puis arrêtées dans l'obscurité par l'ajout de 10 μL d'un mélange d'arrêt/détection préparé dans le tampon d'essai contenant de l'EDTA, des billes donneuses AlphaScreen™ Streptavidin et des billes accepteuses P-TYR-100 pour des concentrations finales de 10 mM d'EDTA et 500 ng/puits de billes donneuses et accepteuses AlphaScreen™. Les plaques d'essai ont été incubées pendant 60 minutes à température ambiante dans l'obscurité, et les plaques ont été lues sur un lecteur de plaques multifonction Perkin Elmer, Envision (longueur d'onde d'excitation : 640 nm, longueur d'onde d'émission : 570 nm). L'effet de la concentration d'enzyme a été appliqué pour les inhibiteurs à liaison forte, et si nécessaire, les valeurs IC50 ont été converties en valeurs Ki si la concentration d'enzyme était supérieure aux valeurs IC50 dans les conditions d'essai utilisées.

• Lignées cellulaires

  NCI-H716 and SNU-16 cells

• Concentrations

  0.1 μM or 1 μM

• Temps dincubation

  24 or 72 hours

• Méthode

  Cells are plated and incubated at 37°C overnight and subsequently treated with 0.1 μM or 1 μM of ARQ 087 for 24 or 72 hours. The cells were fixed and stained with Cycletest Plus Reagent kit and cell cycle profiles were analyzed using a FACS Calibur flow cytometer.

• Modèles animaux

  female NCr nu/nu mice (SNU-16) or CB17 SCID mice (NCI-H716)

• Dosages

  0, 25, 50, and 75 mg/kg

• Administration

  oral administration