PLX-4720

Catalogusnr.S1152 Batch:S115205

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C17H14ClF2N3O3S
Molecuulgewicht 413.83 CAS-nr. 918505-84-7
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 82 mg/mL (198.14 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving PLX4720 is een krachtige en selectieve remmer van B-RafV600E met een IC50 van 13 nM in een celvrije test, even krachtig als c-Raf-1 (Y340D- en Y341D-mutaties), 10-voudige selectiviteit voor B-RafV600E dan wild-type B-Raf.
Doelen
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
In vitro PLX-4720 vertoont >10 keer selectiviteit tegen wild-type B-Raf en >100 keer selectiviteit ten opzichte van andere kinasen zoals Frk, Src, Fak, FGFR en Aurora A met IC50 van 1,3-3,4 μM. Deze verbinding remt de ERK-fosforylering significant in cellijnen die B-RafV600E bevatten met IC50 van 14-46 nM, maar niet in cellen met wild-type B-Raf. Het remt significant de groei van tumorcellijnen die het B-RafV600E-oncogen bevatten, zoals COLO205, A375, WM2664 en COLO829 met GI50 van respectievelijk 0,31 μM, 0,50 μM, 1,5 μM en 1,7 μM. Bovendien induceert deze chemische behandeling bij 1 μM celcyclusarrest en apoptose uitsluitend in de B-RafV600E-positieve 1205Lu-cellen, maar niet in de B-Raf wild-type C8161-cellen. Deze verbindingbehandeling (10 μM) induceert significant >14-voudige expressie van BIM in de PTEN+-cellen, vergeleken met de PTEN- cellijnen (4-voudig), wat een verklaring geeft voor de resistentie van PTEN--cellen tegen deze chemisch geïnduceerde apoptose.
In Vivo Orale toediening van PLX-4720 met 20 mg/kg/dag induceert significante vertragingen in tumorgroei en regressies in B-RafV600E-afhankelijke COLO205-tumorxenografts, zonder duidelijke bijwerkingen bij muizen, zelfs bij een dosis van 1 g/kg. Deze verbinding bij 100 mg/kg tweemaal daags elimineert bijna volledig de 1205Lu-xenografts die B-RafV600E bevatten, terwijl het geen activiteit heeft tegen C8161-xenografts die wild-type B-Raf bevatten. De anti-tumoreffecten van deze verbinding correleren met de blokkade van de MAPK-route in die cellen die de V600E-mutatie bevatten. Deze chemische behandeling bij 30 mg/kg/dag remt de tumorgroei van 8505c-xenografts significant met >90%, en vermindert dramatisch verre longmetastasen.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • In vitro Raf kinase-activiteiten

    De in vitro kinase-activiteiten van wild-type Raf en mutanten worden bepaald door de fosforylering van gebiotinyleerd-MEK-eiwit te meten met behulp van Perkin-Elmer's AlphaScreen-technologie. Voor elk enzym (0,1 ng) worden reacties van 20 μL uitgevoerd in 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01% Tween-20, 100 nM biotine-MEK-eiwit, verschillende ATP-concentraties en toenemende concentraties PLX-4720 bij kamertemperatuur. Reacties worden gestopt na 2, 5, 8, 10, 20 en 30 minuten met 5 μL van een oplossing die 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA en 0,3% BSA bevat. De stopoplossing bevat ook phospho-MEK-antilichaam, met Streptavidin gecoate Donorkralen en Proteïne A Acceptorkralen uit de AlphaScreen Proteïne A Detectiekit. Het antilichaam en de kralen worden 30 minuten vooraf geïncubeerd in de stopoplossing in het donker bij kamertemperatuur. De uiteindelijke verdunning van het antilichaam is 1/2.000, en de uiteindelijke concentratie van elke kraal is 10 μg/mL. De assayplaten worden een uur bij kamertemperatuur geïncubeerd en vervolgens afgelezen op een PerkinElmer AlphaQuest-lezer.
Celassay:[1]
  • Cellijnen

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • Concentraties

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • Incubatietijd

    24, 48, and 72 hours

  • Methode

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
Dierstudie:[1]
  • Dierlijke modellen

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • Doseringen

    5, 20, or 100 mg/kg

  • Toediening

    Oral gavage once or twice daily

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

Klantproductvalidatie

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

Gegevens van [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

Gegevens van [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

Gegevens van [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

Gegevens van [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 Is geciteerd door 206 Publicaties

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.