740 Y-P (PDGFR 740Y-P)

Le peptide PDGFR 740Y-P stimule un réponse mitogène dans les cellules musculaires. La capacité du peptide 740Y-P à stimuler la mitogenèse est très spécifique et n'est pas une caractéristique générale des peptides liant le domaine SH2 perméables aux cellules[2].

Le 740Y-P est aussi efficace qu'un facteur de croissance (FGF2) pour favoriser la survie des cellules neuronales via la cascade de survie établie PI 3-kinase-Akt. La stimulation de la survie des cellules neuronales par le peptide PDGFR740Y-P est dose-dépendante et ne nécessite pas d'insuline[1].

Le 740 Y-P diminue le degré des niveaux de ROS dans les tissus hippocampiques traités par Aβ(25-32) et augmente l'étendue de la phosphorylation d'AKT et de PI3K dans un modèle de rat de la maladie d'Alzheimer.

• Lignées cellulaires

  NIH 3T3 cells

• Concentrations

  50 μg/ml

• Temps dincubation

  2 h

• Méthode

  NIH 3T3 cells (2×10⁶) are incubated in suspension at 37°C in Ca2+ and Mn2+ free HBSS, 10% FCS containing either 50 μg/ml of 740Y-P peptide or an equal volume of PBS as a control. After 2h cells are centrifuged, washed and trypsinised to degrade non-internalised peptide. Cells are then resuspended in lysis buffer (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 10% Glycerol, 2% NP40, 0.25% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM Vanadate, Protease inhibitors "complete" cocktail from Boehringer-Mannheim) for 1 h at 4°C. Lysates are clarified by centrifugation at 1.4×10⁴g for 5 min and the supernatants are incubated for 1h with streptavidin-agarose beads. Beads are subsequently washed three times in lysis buffer and finally boiled in SDS sample buffer and resolved by SDS-PAGE on a 12% gel, transferred to nitrocellulose and immunoblotted with the p85 monoclonal antibody.